产酸克雷伯氏菌赖氨酸脱羧酶的异源表达及粗酶性质-微生物学报.PDF

生 物 工 程 学 报 李乃强 等/产酸克雷伯氏菌赖氨酸脱羧酶的异源表达及粗酶性质 527 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn April 25, 2016, 32(4): 527−531 DOI: 10.13345/j.cjb.150380 ©2016 Chin J Biotech, All rights reserved 生物育种与工艺优化 1,2 2 1 李乃强 ，于丽珺 ，徐岩 1 214122 2 201203 珺 , , . . , 2016, 32(4): 537–531. Li NQ, Yu LJ, Xu Y. Heterologous expression and characterization of Klebsiella oxytoca lysine decarboxylase. Chin J Biotech, 2016, 32(4): 527–531. 摘 要: 赖氨酸脱羧酶，可以催化赖氨酸脱羧生成戊二胺。戊二胺是重要的平台化合物，可以合成新型聚酰 胺材料、脂肪族异氰酸酯等新材料。本研究对来自于产酸克雷伯氏菌的赖氨酸脱羧酶进行异源表达。以pUC18 质粒为载体，将来源于产酸克雷伯氏菌的赖氨酸脱羧酶基因 ldc 克隆到大肠杆菌，得到菌株 LN18 。在添加 0.5 mmol/L IPTG 的LB 培养基中，对LN18 进行摇瓶培养，发酵液酶活可达到35 U/g 发酵液，从发酵液制备 的赖氨酸脱羧酶粗酶蛋白的酶活可以达到 30 000 U/g 粗蛋白。产酸克雷伯氏菌赖氨酸脱羧粗酶蛋白大小约 80 kDa ，粗酶的最适温度和pH 值分别为 55 ℃和5.5 ，与文献中报道的大肠杆菌的赖氨酸脱羧酶CadA 在pH 8.0 几乎没有酶活不同，产酸克雷伯氏菌的赖氨酸脱羧酶在pH 8.0 的酶活达到最优pH 下酶活的30% 以上。金属离 子对酶活有一定的影响，Mg2+对酶活有促进作用，Fe2+ 、Zn2+ 、Ca2+有一定的抑制作用。 : 赖氨酸脱羧酶，产酸克雷伯氏菌，戊二胺，异源表达，pH 稳定性 Heterologous expression and characterization of Klebsiella oxytoca lysine decarboxylase 1,2 2 1 Naiqiang Li , Lijun Yu , and Yan Xu 1 Key Laboratory of Industrial Biotechnology of Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University , Wuxi 214122, Jiangsu , China 2 Cathay Industrial Biotech Ltd., Shanghai 201203, China Abstract: Cadaverine is a biogenic amine that has the potential to become an important platform chemi