实验蛋白质含量测说定2012.pptVIP

生物化学与分子生物学基础实验 生物化学与分子生物学基础实验 实验一 几种蛋白质定量测定方法的比较 生物化学与分子生物学基础实验 1 掌握紫外吸收法、Folin－酚试剂法（Lowry法）和考马斯亮蓝染色法（Bradford法）测定蛋白质含量的原理和方法 2 掌握分光光度计的原理和使用方法 实验目的 生物化学与分子生物学基础实验 ①有多少样品可供分析; ②蛋白质样品浓度大约是多少; ③样品中含有哪些可能影响定量的化学物质； ④所选方法是否简单、可靠； ⑤含量测定的专一性要求是否很高。 选择合适的蛋白质含量测定方法主要基于几点考虑： 生物化学与分子生物学基础实验 常用的方法 物理性质：紫外吸收法 化学性质：Folin－酚试剂法（Lowry法），BCA法（Bicinchoninic acid 法），凯氏定氮法，双缩脲法（Biuret法），胶体金测定法，等等 染色性质：考马斯亮蓝染色法（Bradford法）、银染法 测定绝对含量应用凯氏定氮法（蛋白质的含氮量为16％）。 生物化学与分子生物学基础实验 蛋白质在紫外光区（190nm-360nm）有两个强烈吸收峰：280nm和190nm。 280nm有吸收的电子所需能量较少，因为这些光子存在于芳香环的共轭双键中，色氨酸(Trp)、和酪氨酸(Tyr)有芳香环，可吸收280nm波长的