超低温保存技术.pptVIP

 超 低 温 保 存 技 术 超低温保存 ： 概念：在液氮（LN）（-196℃）中使保存的生物材料的物质代谢和生长活动几乎完全停止，而细胞活力和形态发生的潜能仍保存。 这样有利于保存和抢救物种，尽可能避免组织细胞培养及自然界中积累性突变等的发生，便于国际间的种质交换。经过超低温保存后的再生植株，有可能产生高抗寒性的新材料。 超低温保存正成为长期稳定地保存植物种质资源及珍贵实验材料的一个重要方法。  1973年，Nag和Street将胡萝卜悬浮培养细胞保存在液氮中一段时间，解冻后再培养观察到细胞的生长。这是超低温保存植物材料成功的首次报道。  之后人们对超低温保存技术的研究越来越深入，尤其对降温方法的研究。  按照待保存材料是否需要包埋，降温方法可分为两大类： 1 材料不需要包埋的降温方法  2 材料需要包埋的降温方法  材料不需要包埋的降温方法  1.1 慢冻法  1.2 快冻法  1.3 两步冰冻法  1.4 逐级冰冻法  1.5 干冻法  1.6 玻璃化法 （vitrification）   1.1 慢冻法 慢冻法是指以0.1～10℃.min-1的速度进行降温，只要降温速度适宜，在冰冻保护剂作用下，即可避免在细胞脱水时细胞内产生冰晶，又能防止因溶质含量增加引起的“溶液效应”。 原生质体、悬浮培养细胞和愈伤组织等细胞类型一致的培养物，采用这种方法效果较好。一般来说，降温速度为0.5～2℃.min-1。    1.1 慢冻法 为均匀分配降温过程中的温度，同质降温待超低温保存材料，从而减少异质冰晶的形成，提高保存成功率，出现了演变于慢冻法的微滴冻存法。其方法是将含有一个茎尖的低温保护剂溶液滴于铝箔上，用程序降温仪以适宜的速度（一般在0.1～0.2℃.min-1之间）将其降温至转移温度（一般为-40～-70℃），最后浸入液氮保存。 1.2 快冻法 快冻法即将经0℃或其他温度预处理过的材料直接放入液氮或其蒸气相中，此种方法的降温速度可达到300～1000℃.min-1，也有人认为可达到1000℃.min-1以上。 其降温原理：利用超速冷冻，可使细胞内的水分迅速通过冰晶生成的危险温度区（-140 ～ -10℃），使细胞内的水分来不及形成冰晶中心，就降到-196℃的安全区。此时细胞内的水为玻璃化状态，该状态对细胞结构不产