病毒感个染实验诊断.pptVIP

感染病毒的临床意义必须结合流 行病学资料、临床表现、病毒种 类及机体的病理变化作综合分析， 才能判定。 用于病毒的分型诊断最具敏感和 准确性。也可用于检查患者病后 或人工免疫后，机体血清中抗体 增加情况。 3.空斑或蚀斑形成试验 空斑是指在单层细胞中被病毒感染引 起死亡的细胞区域，周围被活细胞包 围。一般而言，一个空斑是由一个感染 性病毒颗粒感染所引起的。不同的病毒 引起的空斑形态和大小不同。可进行病 毒颗粒的计数、纯化，结合中和试验可 进行病毒的鉴定。 4.干扰现象 某些病毒间存在着干扰现象， 如某些型别的鼻病毒能干扰 以后进入的副流感病毒的增 殖，从而阻抑后者的红细胞 吸附作用。 5.红细胞吸附及吸附抑制试验 正粘病毒，副粘病毒感染的宿主 细胞，病毒增殖后产生细胞病变， 但在细胞表面含有病毒某些抗原 成分(血凝素)，能吸附鸡、豚鼠 或猴红细胞。 可作为初步鉴定。如果在培养瓶 中加入相应的血凝素抗血清后， 不出现红细胞吸附现象，是为红 细胞吸附抑制试验阳性，可作为 病毒鉴定的依据。 4．血凝试验及血凝抑制试验 某些病毒可与一定种类的哺乳 动物或禽类的红细胞产生血凝 现象。加入相应的血凝素抗体 可抑制血凝现象的发生，是为 血凝抑制试验。可作为病毒型 别确定的依据。 5．病毒的大小及形态 可用电子显微镜观察病毒的 大小及形态。 6．核酸类型鉴别及序列测定 利用5—溴-2-脱氧尿苷(BUDR)抑 制DNA复制的特性，在细胞培养液中 加入该物质，可抑制DNA病毒的复制 和增殖，抑制细胞病变的出现，但对 RNA病毒无抑制作用，以此判断病毒 核酸类型。 对病毒核酸特异序列或全序列的 碱基排列测定或 DNA杂交、DNA- RNA杂交来鉴定病毒。 7．耐酸试验 肠道病毒对酸有耐受力，而 鼻病毒在酸性环境下易被灭活。 8．乙醚敏感试验 病毒外围如有类脂包膜，则易 被乙醚破坏，而失去感染性，不 能感染细胞。可作为病毒是否具 有类脂包膜的依据，也可用氯仿 或去胆酸钠代替乙醚进行试验。 9．免疫荧光抗体染色 将感染细胞固定，用特异抗血 清荧光标记染色，在荧光显微镜 下，可见细胞内荧光，即可确定 型别。 第三节病毒感染快速诊断 通过测定病毒的特异标志成分，如 特殊形态、特异的抗原成分及病毒 的核酸，早期确认病毒的感染，是 病毒学诊断的重大发展。 一、形态学检查 1．光学显微镜 观察病毒感染细胞出现的包涵体。 根据特点可作出辅助诊断。狂犬病 病毒在脑细胞出现嗜酸性的圆形或 椭圆形包涵体，称为内基小体。巨 细胞病毒在上皮细胞的细胞核内出 现周围绕有一轮晕似“猫头鹰眼”样 大型嗜酸性包涵体。 2．电子显微镜检查 (1)电镜直接检查：早期病毒感染标 本的病毒颗粒。如“秋季泻”患儿 粪便中的轮状病毒、甲肝患者粪 便中的HAV，疱疹病毒的疱疹液， HBV患者血清，均可观察到特征性 病毒颗粒。 (2)免疫电镜检查：在标本中加入 抗体。使病毒聚集成块负染观 察，更易发现病毒体，灵敏度 可提高100倍。 二、病毒抗原检测 病毒抗原是病毒特异性的标志， 通过免疫学技术检测标本中特 异性抗原存在，可以早期诊断 病毒感染。 1．免疫荧光技术 适合于型别少， 细胞培养难以成功的病毒，如流 感病毒、副流感病毒、疱疹病毒、 巨细胞病毒、腺病毒等。肝活检 组织中的肝炎病毒、神经组织中 的单纯疱疹病毒、脑组织中的狂 犬病毒或其他脱落细胞和活检组 织中的病毒抗原检测。 2．酶免疫技术 有酶免疫组化和 酶免疫吸附(ELlSA)试验法。测 定标本中游离的抗原或抗体。 如检测乙型肝炎病毒的表面抗 原(HBsAg)，HIV感染病人的P24 抗体等。 3.其他技术 如固相放射免疫技术、 发光免疫分析技术、胶体金标记 的免疫层析技术等。 三、早期抗体检测 检测病毒感染机体后产生的早期特异性抗体，如测定特异性IgM可以快速明确诊断各种病毒引起的新生儿先天性感染，测定HAV感染后抗HAV的IgM抗体可以明确诊断HA等。 四、病毒核酸检测 只要有完整的特异基因片段存在， 就可进行诊断。 1．斑点杂交法 将待测的DNA或R