MTT法小结-目的和意义.pptVIP

MTT法小结 MTT法目的和意义 检测细胞存活和生长情况 用于评价细胞毒作用 原理 四唑盐是一种能接受氢原子的染料，简称MTT。 活细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量，从而反映细胞的增殖情况。 在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。 微生物污染可导致本法假阳性结果 MTT的配制 MTT一般最好现用现配，过滤后4oC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。 MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，因为时间较短。 配制MTT时用PBSph=7.4溶解,也有人用生理盐水配，60℃水浴助溶。 贴壁细胞操作步骤 1.??接种细胞：用0.08%胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含血清的培养液配成单个细胞悬液，以每孔103～104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积100ul。 （边缘孔用无菌PBS填充）。 2.??培养细胞：将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5%