MTT细胞毒性检测方法.pptVIP

MTT的配制 MTT一般最好先用现配。 过滤后4度保存两周，或-20度长期保存（避光），避免反复冻融 MTT对菌很敏感 ，配成的MTT需要无菌 当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了 实验步骤 1:接种细胞 4. 96孔板边缘孔用无菌PBS填充 或培养液 5. 防止药物与MTT反应。 6. MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。 现代应用 * 细胞毒性检测方法 ——噻唑蓝比色法（MTT法） 细胞毒性检测 细胞形态学观察 细胞生长状态观察 细胞活性检测 细胞活性指标 细胞膜对核酸染料的通透性 代谢活性 膜电位 噻唑蓝比色法 噻唑蓝（MTT）比色法是目前应用最广泛的一种检验细胞活性的方法 原理：线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为难溶解的蓝色结晶甲瓒Formazan，并沉积在细胞中，而死细胞无此功能. 细胞活性 琥珀酸脱氢酶活性 Formazan含量 悬浮细胞： 1.5~1×105/ml 贴壁细胞：4~5×104/ml 100ul/well 加药（浓度梯度） 2:培养细胞,设置适宜的时间点 可根据试验目的和要求决定培养时间 （24h,48h,72h） 3:呈色 每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)10ul.继续孵育2~4 h后，加MTT buffer 100ul,过夜孵育 4:比色 用酶联免疫检测仪 测其