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PCR产物的酶切及琼脂糖凝胶电泳回收 限制性内切核酸酶消化DNA 限制性内切核酸酶（restriction enzyme) 是一类识别DNA上3-8个特定核苷酸序列并产生切割反应的内切核酸酶(endonuclease)的总称。在基因操作中，这些酶作为“剪刀”对DNA起剪切作用，是分子生物学研究中不可缺少的酶之一。 在酶切实验中： 如果用同一种酶切割载体和插入DNA两者能正确连接，但不能确定方向。 如果用同的限制酶切割，所得的单链突起能互补，则两者能正确连接。但也不能确定其方向。 若限制酶切割所得的片段是平末端，虽能连接，但效率低，而且不能确定其方向。 用两种不同的限制酶共同切割载体和插入片断，而且所得两末端结构不同，连接后就能确定其方向。 因此，运用两种不同的限制酶的模式被广泛应用。 在我们今天的实验中，用到两种限制性酶分别是BamH I 和Hind III ，这两种酶切割后产生的片段都具有粘性末端，可以保证酶切产物与载体正确的连接。 酶切体系 PCR产物 0.5μg Buffer K（10X） 5μl ddH2O 加至 48μl BamHⅠ（20U/ul） 1μl Hind III （20U/ul） 1μl 总体积 50