己糖激酶hk2中的o-glcnac糖基化位点鉴定以及hk2敲除细胞株到的构建.docxVIP

山东大学硕士学位论文3．4 山东大学硕士学位论文 3．4 OGT蛋白的表达与纯化 3 1 4．讨{仑 33 第三章脉2蛋白的DGlcNAc糖基化位点的鉴定 35 1．实验材料 ．．35 1．1细胞株、质粒 ．35 1．2主要试剂 ．35 1．3仪器设备 ．35 2．实验方法及步骤 ．．35 2．1 体外标记DG】cNAc 35 2．2 MS测定DGkNAc糖基化位点 ．．36 2．3 腿2 DGlcNAc糖基化位点的进一步鉴定 36 3．实验结果 ．．39 3．1 体外标记D-G1cNAC 39 3．2 MS结果 40 3．3 构建DGlcNAc糖基化位点突变的胍2表达载体 ．41 3．4 Westem blottillg进一步检测糖基化位点 ．．43 4．{寸{念 44 第四章内源性瞰2基因敲除细胞株的构建 ．．46 1．实验材料 ．．46 1．1细胞株、质粒 ．46 1．2主要试剂 ．46 1．3仪器设备 ．．46 2．实验方法以及步骤 ．．46 2．1靶序列重组载体的构建 ．46 2．2人乳腺癌细胞的转染及突变效率的检测 ．50 2．3 HK2基因敲除的单克隆MDA—MB一231细胞株的构建 ．．52 3．实验结果 ．．52 3．1 lentiC对SPRV2质粒单酶切结果 52 3．2 T7核酸内切酶I(WEI)酶切实验结果 ．．54 万方数据 山东大学硕士学位论文3．3