农杆菌介导McCHIT1基因遗传转化水稻茎尖研究.PDFVIP

中国农学通报 2016,32(27): 114-120 Chinese Agricultural Science Bulletin 农杆菌介导McCHIT1基因遗传转化水稻茎尖研究 1 1 1,2 张笑寒 ，仇志浪 ，赵德刚 1 （贵州大学农业生物工程研究院/生命科学学院，山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室， 贵阳550025； 2 贵州省山地生态与农业生物工程2011 协同创新中心，贵阳550025） 摘 要：为了提高农杆菌介导的水稻茎尖遗传转化效率，笔者以贵州特有的地方水稻品种‘平塘黑糯’茎 尖为材料，以含有Ubiqutin 启动子驱动苦瓜几丁质酶基因McCHIT 1 表达的植物表达载体pCambia-Ubi- McCHIT 1 为转化载体，采用正交试验设计，系统研究了菌液OD600 值、真空处理时间和真空渗透压强对 水稻茎尖遗传转化效率的影响。结果表明：在3 个因素中，真空处理时间是影响水稻转化效率和死亡率 的最关键因素。农杆菌介导‘平塘黑糯’茎尖遗传转化的最优条件为农杆菌菌液浓度OD600 为1.0、真空 处理时间为7 min 、真空渗透压强为15 kPa 。GUS 组织化学染色和PCR 分子鉴定表明，通过本研究优化 的农杆菌介导水稻茎尖遗传转化体系，已将苦瓜的几丁质酶基因McCHIT 1 已整合到水稻基因组中，获 得转McCHIT 1 基因‘平塘黑糯’新种质。 关键词：水稻；茎尖；遗传转化；McCHIT 1基因 中图分类号：Q785 文献标志码：A 论文编号：cas GeneticTransformationofMcCHIT1GeneintoRiceShootTips viaAgrobacterium-mediatedMethod ZhangXiaohan,QiuZhilang,ZhaoDegang1 1 1,2 (TheKeyLaboratoryofPlantResourcesConservationandGermplasmInnovationinMountainousRegion(MinistryofEducation),1 CollegeofAgricultureBioengineering/CollegeofLifeSciences,GuizhouUniversity,Guiyang550025; 2The2011CollaborationInnovationCenterforMountainEcologyandAgro-bioengineeringinGuizhouProvince,Guiyang550025) Abstract:ToimprovetheefficiencyofgenetictransformationofriceshoottipsviaAgrobacterium-mediated method,aglutinousricevariety “PingtangHeinuo”wasusedastheresearchmaterial,thevectorpCambia- Ubi-McCHIT1withUbipromotordrivingbittermelonchitinasegeneMcCHIT1wasusedasthetransformation vector,weinvestigatedsystematicallytheinfluenceofAgrobacteriumconcentration,vacuumtreatmenttime andvacuumosmoticpressureontheefficiencyofAgrobac