实验一鸡卵类粘蛋们白的分离与纯化.pptVIP

实验一 鸡卵类粘蛋白的 分离与纯化 【学科知识点】 选择性沉淀法从鸡蛋清中提取鸡卵类黏蛋白； 凝胶层析法纯化鸡卵类黏蛋白粗提液； 离子交换柱层析法进一步纯化鸡卵类黏蛋白提取液； 透析纯化的方法去除样品中盐类； 紫外分光光度法鉴定样品含量及纯度； 有机溶剂等电沉淀法获得鸡卵类黏蛋白纯品。 实验内容 【基本原理】 鸡卵黏蛋白是一种糖蛋白，存在于鸡蛋清中，在10％三氯乙酸或50％丙酮溶液中有较好的溶解度。选择合适的pH值，三氯乙酸浓度和丙酮浓度，可以从蛋清中获得鸡卵黏蛋白的粗提液。 蛋白质混合溶液在经过凝胶层析柱时，大分子蛋白质沿颗粒间的空隙以较快的速度流过凝胶柱，最先流出柱外。而盐或其他小分子物质因进入凝胶颗粒的微孔中向下移动的速度较慢，所以最后流出柱外。因此通过凝胶层析可以达到除去小分子物质的目的。 1）凝胶的处理 量取100mL Sephadex G-25凝胶，加入200mL磷酸盐缓冲液，沸水浴中1h。上柱前用真空干燥器抽气。 【基本原理】 初步提取得到的鸡卵类粘蛋白，经DEAE-纤维素离子交换柱进一步纯化，可除去少量的杂蛋白。得到鸡卵类粘蛋白的纯溶液。然后经透析、丙酮沉淀、抽真空干燥即可获得鸡卵类粘蛋白纯品。 7)蛋白溶液中加入3倍体积冷丙酮，用塑料薄膜封口，放入冰箱静置4h。