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老年性痴呆的细胞模型 1.神经细胞. 2.神经嵴源细胞. 3.神经胶质细胞. 4.非神经细胞. 5.基因工程细胞 AD 细胞模型是在体外进行诱导和建立，与 AD 动物模型相比较，具有可避免各种干扰因素，实验条件容易控制等优点。 6.杂交组织细胞 1.神经细胞 (1)原代培养的海马神经细胞 海马与学习记忆有关，也是发生衰老变化最早部位。AD病理改变最严重的脑区之一是海马。 不同结构片段的Aβ产生不同的神经生物效应： ① Aβ1~38的活性与Aβ1~40及Aβ25~35一致; ② Aβ1~28的毒性作用小于Aβ1~40; ③ Aβ1~16和Aβ17~28无神经营养和神经毒性作用。 低浓度Aβ(40nmol/L)对海马神经元是营养作用; 高浓度Aβ(100nmol/L)对成熟的神经元是毒性作用,对于分化早期的神经元,Aβ表现为神经营养作用。 Aβ25~35和Aβ1~42诱导培养的海马神经细胞建立AD细胞模型, 引起海马神经细胞退变是通过凋亡途径。 Loo、Watt Yankner Aβ诱导的AD细胞模型表明细胞发生脂质过氧化较严重,自由基生成增加,细胞出现凋亡改变,与AD发病机制中自由机和细胞凋亡学说相符,再则选用此种细胞类型更贴近实际AD受损细胞。但也存在以下缺陷： ① 原代细胞培养难度大，周期长。 ② 培养系统不够稳定。 ③ 只能模拟出AD的部分病理改变。 (2)原代培养的大脑皮质神经细胞 大脑皮质是人类高级中枢，是构成脑内复杂突触连接的关键脑区。早已明确，大脑额、顶、颞叶参与学习记忆活动。 ① Aβ诱导建立AD细胞模型, Aβ导致大脑皮质细胞凋亡 ②氰化钠诱导原代培养的大脑皮质神经细胞，建立 AD细胞模型，观察内源性神经细胞缺氧引起的损伤 培养的海马神经元对损伤因素较培养的大脑皮质神经细胞敏感,但皮质神经细胞比海马细胞容易分离和获取,二者出现的生物化学、组织病理学及形态学的改变基本相似。 (3)原代培养的小脑颗粒细胞 此模型表现为细胞凋亡和Aβ产生增加,较符合AD的病理改变,与前两种原代培养的细胞相比,细胞易获取和培养。 小脑是参与学习记忆脑区之一，因此小脑神经细胞也是进行AD研究可取的细胞。 降低细胞外钾离子的浓度,诱导建立AD模型,检测细胞Aβ水平,提示原代培养的小脑颗粒神经元发生退行性变可导致Aβ过量产生,而Aβ过量产生又可加重神经元的损伤。 缺点为：细胞类型不是AD受损最显著细胞，培养系统缺乏稳定性。 (4)NG108-15细胞系 NG108-15细胞系是小鼠成神经细胞瘤和大鼠神经胶质瘤的融合杂交系。在两种不同的培养条件下此细胞系可分别处于分裂生长状态和分化成熟状态。NG108 15细胞系经培养诱导其分化10d后，加入Aβ1-40，继续培养48h，建立AD细胞模型。用此细胞系建立AD模型，培养系统稳定性较好，又具有神经细胞特性，具有一定的代表性。形态学有无改变有待于进一步的研究。 2.神经嵴源细胞 Step 1 Step 2 Step 3 Title in here 凋亡 Title in here 与凋亡密切相关的 p75NGFR 高度表达 Title in here Bax 蛋白 表达水平上调 皮肤内神经嵴源上皮黑素细胞，具有来源、形态、反应方式及许多分子信号与神经细胞相似的特点。当NGF与Aβ同时加入上皮黑素细胞，可预防由Aβ诱导的黑素细胞凋亡，因此，人类上皮黑素细胞可做为体外研究 AD 发生机制有价值的细胞。 (1) 上皮黑素细胞 Aβ处理培养的人上皮黑素细胞 (2)PC12细胞株 前面已提出原代培养神经细胞的缺点,为了克服这些缺点,许多学者早已在寻找一种具有神经细胞特性,又可传代的稳定的细胞株。 1976年Greene和Tischler成功建立了具有神经特性的PC12细胞株。PC12是从移植的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤单克隆的细胞株。 目前 PC12 细胞株是国际上基本公认在体外进行神经生物，神经化学及神经系统疾病研究理想的模型 (3)P19细胞 视黄酸（RA）诱导 P19细胞作为研究神经分化机制的模型 P19向神经元分化 选择性的APP695表达增加，并伴随有神经细胞样的形态分化 神经源性的小鼠胚胎癌细胞株 选择性的诱导其向单纯的神经元分化 将RA和抑制非神经元生长的阿糖胞苷类药物同时加入培养的P19细胞 3.神经胶质细胞 AD的重要病理改变之一是含有Aβ的老年斑的形成,神经胶质细胞在AD等神经退行性疾病中起着不容忽视的作用。 活化的小胶质细胞和反应性星形胶质细胞与AD患者的老年斑有关,小胶质细胞对老年斑有高度亲和力，参与AD老年斑的形成。神经胶质细胞与AD发病机制有密切关系 此种细胞模型培养系统稳定，细胞可以传代培养，大大缩短了实验周期。缺点是不能完全代表神经元的变化情况。 4.非神经细