机械牵张应力对人根尖牙乳头干细胞增殖分化的影响.PDFVIP

医学研究生学报 ２０１７年１０月 第３０卷 第 １０期　 Ｊ Ｍｅｄ Ｐｏｓｔｇｒａ，Ｖｏｌ．３０，Ｎｏ．１０，Ｏｃｔｏｂｅｒ，２０１７ ·１０４１· 论　 　 著 （基础研究） 机械牵张应力对人根尖牙乳头干细胞增殖分化的影响 杜希希，李　 波，袁小平 　 　 ［摘要］　 目的　 根尖牙乳头干细胞（ＳＣＡＰ）被看作是根尖周组织再生的种子细胞并被用于以干细胞为基础的根尖周组 织再生工程中。 文章探讨不同力值的机械牵张应力对人ＳＣＡＰ增殖、分化潜能的影响。 　 方法　 利用组织块酶消化法及有限 稀释法分离、培养人ＳＣＡＰ并加以鉴定。 根据对细胞加载机械牵张应力大小不同将实验分为１５０、２００、２５０ｇ组，另设空白对照 组（未做加力处理）。 利用ＭＴＴ法检测不同大小静态机械牵张应力刺激对ＳＣＡＰ增殖活性的影响。 利用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测机 械牵张应力作用下ＳＣＡＰ成骨／ 成牙分化相关蛋白（ＡＬＰ、ＯＳＸ、ＤＳＰ）表达的变化以及不同大小静态机械牵张应力作用下ＳＣＡＰ 内质网应激分子伴侣ＧＲＰ７８的表达情况。 　 结果　 ＳＣＡＰ 细胞经过３周的成骨诱导后进行茜素红染色，镜下可见块状矿化结 节的出现，ＳＣＡＰ 细胞经过２周的成脂诱导后进行油红Ｏ染色，镜下可见红染的脂滴出现。 ＳＣＡＰ 细胞表面抗原表型通过流式 细胞仪检测分析显示：ＳＣＡＰ对ＣＤ３１（２．４６％，内皮细胞标记物）和ＣＤ４５（０．０７％，造血干细胞标记物）呈阴性表达，对 ＣＤ９０ （９９．８９％，间质细胞标记）和ＳＴＲＯ⁃１（１５．２１％，干细胞标记）呈阳性表达。 与１５０ｇ组比较，２００ｇ加力组的加载机械牵张应力第 ２天，ＳＣＡＰ增殖能力明显下降（Ｐ＜０．０５）；２５０ｇ加力组的加载机械牵张应力的第 ２、３、４、５ 天，ＳＣＡＰ 增殖能力显著下降（Ｐ＜ ０．０５）。 与２００ｇ组比较，２５０ｇ加力组的加载机械牵张应力的第２、３、４、５天，ＳＣＡＰ增殖能力显著下降（Ｐ＜０．０５）。 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检测结果显示：加载牵张应力的第５天，与对照组相比，１５０ｇ组、２００ｇ组、２５０ｇ组成骨分化相关蛋白ＡＬＰ 和ＯＳＸ和ＤＳＰ 表达 均显著升高（Ｐ＜０．０５）。 与１５０ｇ组相比，２００ｇ组ＡＬＰ、ＯＳＸ表达差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），ＤＳＰ 表达显著升高（Ｐ＜０．０５）； ２５０ｇ组ＡＬＰ、ＯＳＸ、ＤＳＰ表达均显著降低（Ｐ＜０．０５）。 与２００ｇ 组相比，２５０ｇ 组 ＡＬＰ、ＯＳＸ、ＤＳＰ 表达均显著降低（Ｐ＜０．０５）。 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测显示：加载牵张应力的第 ５ 天，与对照组 ＧＲＰ７８表达（０．２７９±０．０８５）相比，１５０、２００、２５０ｇ 组 ＧＲＰ７８表达 （１．０８５±０．１２８、１．２８９±０．０７６、０．８１０±０．０６７）均显著升高（Ｐ＜０．０５）。 　 结论　 机械牵张应力对人根尖牙乳头干细胞的增殖和成 骨／ 成牙本质分化具有调控作用。 内质网应激参与了机械牵张应力作用下的ＳＣＡＰ 成骨／ 成牙分化过程，并促进了ＳＣＡＰ 成 骨／ 成牙分化。 　 　 ［关键词］　 机械牵张应力；根尖牙乳头干细胞；增殖；分化；内质网应激 　 　 ［中图分类号］　 Ｒ７８３．５　 　 　 ［文献标志码］　 Ａ　 　 　 ［文章编号］　 １００８⁃８１９９（２０１７）１０⁃１０４１⁃０７ 　 　 ［ＤＯＩ］　 １０．１６５７１／ ｊ．ｃｎｋｉ．１００８⁃８１９９．２０１７．１０．００６ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌｓｔｒｅｔｃｈｓｔｒｅｓｓｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｓｔｅｍｃｅｌｌｓｆｒｏｍｔｈｅａｐ⁃ ｉｃａｌ ｐａｐｉｌｌａ ＤＵ Ｘｉ⁃ｘｉ，ＬＩ Ｂｏ，ＹＵＡＮ Ｘｉａｏ⁃ｐｉｎｇ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃｓ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｌｕｚｈｏｕ ６４６０００， Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｃｈｉｎａ） 基金项目：