Wyatt多角度激光光散射凝胶色谱联用系统操作规程.PDF

Wyatt 多角度激光光散射凝胶色谱联用系统操作规程 （Wyatt GPC/SEC – MALS ） 一 试验前准备 1 溶剂准备 水相体系准备：超纯水或配制其它盐溶液~ 1L ，并使用0.22um 滤膜过滤(必须 含0.02%NaN3 抑菌剂) 。 有机相体系准备：HPLC 级溶剂；建议使用0.22um 滤膜过滤 （进口试剂视具 体情况而定）。 2 样品准备 浓度配制（定量环100uL）： 分子量~1000kda ：0.5 - 1mg/mL；分子量~100kda ：1 - 2mg/mL ； 分子量~10kda ：3 - 5mg/mL； 分子量~5kda ：5 - 10mg/mL。 3 检查仪器电路连接 检查仪器电源线是否连接，电源开关、交换机（适用于信号连接通过网线的情 形）是否打开。 二 仪器系统开机及平衡操作 1 分别依次打开泵、柱温箱(设定温度) 、进样系统（手动/ 自动进样器）、示差或 紫外检测器、粘度检测器、多角度激光光散射检测器电源及计算机。待仪器正 常开机后，打开工作站Astra 软件。 2 开启泵，使用超纯水purge 泵~5min ；关闭purge 阀。冲洗系统。待系统平衡 完毕，使用最新配制的流动相冲洗系统。（注：有机体系：直接使用流动相冲 洗系统） 3 将其流速调至0.1mL/min （若接入粘度检测器，必须待粘度检测器进入工作界 面才能开启泵的流速，且IP DP 处于purge on ）； 若系统中未接入GPC/SEC 柱，可直接将流速调至0.1 – 1.0mL/min 冲洗系统（无 粘度检测器），示差检测器purge 阀必须处于“Purge On”状态。 若系统中已接入GPC/SEC 柱，则必须以0.1ml/min 的起始流速，每1－2 分钟 提高0.1ml 的速度，将流速调整至0.4 – 0.5 mL/min，充分平衡系统； （注：为了使系统充分平衡，建议提前一天冲洗和平衡系统；第二天开始试验 （水相系统）。对于有机相体系，一般平衡时间在3 －12h）。 三 试验操作及数据采集与处理 1 待系统充分平衡。逐步调整流速至试验流速；调节示差检测器的Purge 阀处于 处于“Purge Off”状态；待信号稳定后，归零（Zero ）；粘度计（Visco Star ）的 操作方法见附件。待基线稳定。 2 在Astra 软件中调用相应的试验模板（推荐使用安装工程师创建的 Template/Method ）；点击Experiment- Run （此时，软件出现“waiting for……对 话框”）； （注：单针进样调用模板的基本操作如下： File – New – Experiment from Template/Method – My Templates/methods ；选择相 应试验Tempalte/method 。 自动进样器进样调用模板的基本操作如下： File – New – sample set Template/blank sequence – My Templates/method ；选择 相应试验Template/method 。） 3 进样，并将进样阀由load 转至inject 状态。将已配制样品，通过进样系统进样。 （注：样品必须使用0.22um 或0.45 膜过滤或离心处理。样品尽可能使用流动 相配制）。 4 数据采集。一旦进样系统进样。Astra 软件自动开始采集数据；当数据采集完 毕；软件根据事先设定时间运行至停止。也可采用手动停止的方式：Experiment – Stop。 5 数据保存。待数据采集完毕。依次点击File –Save as... ；命名文件。 6 数据处理。其流程为： Baselines – peaks – dn/dc 输入 （且normalise ）–查看report 。 注：（若该Template/Method 中，已使用 50kDa 标准样品（例如BSA 、dextran ） 在该体系下normalize ，则不需要重复进行该操作）。 7 查看report 。 四 关机操作 1 关闭激光检测器、紫外检测器；调节示差检测器、粘度检测器purge 阀处于“On” 状态。充分冲洗系统；水相体系：使用流动相充分冲