问题分析指南.PDFVIP

FOREGENE Animal Tissue Direct PCR Kit Instruction Manual 问题分析指南 以下针对动物组织直接PCR 系列试剂盒在动物组织直接PCR 实验中可能遇到的问题 进行分析，希望能对您的实验有所帮助。另外，对于在操作说明和问题以外的其他实 验或技术上的问题，我们设有专门的技术支持帮助您。如有任何需要可联系我们： 028或E-mali：Tech@ 。 在试剂盒的使用过程中往往会遇到许多问题，比如：没有PCR 扩增产物、PCR 特异 性差等，以下就分别对使用Animal Tissue Direct PCR Kit 系列试剂盒可能会遇到的问 题进行分析。建议在进行直接PCR 的同时设置阳性对照或阴性对照以便后续分析实验 结果。 正对照、待测样本均无条带 1. PCR 反应体系或反应条件不合适。 建议：使用梯度PCR 摸索PCR 最佳反应条件。 2. PCR 试剂保存不当失去活性。 建议：2× PCR Mix 应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃ 短时间存放。 3. 引物设计问题。 建议：尝试重新设计引物进行检查。 正对照有目的条带 ，待测样本无条带或条带弱 1. PCR 条件没有使用正确。 建议：请仔细确认2× PCR Mix 的类型，对应相应的PCR 条件进行PCR 扩增。 2. 加入组织裂解液过量。 建议：增大反应体系，或减少裂解液的用量。 3. 样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA 基因组已经降解。 建议：裂解混合液液可在4℃保存2-3 天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 4. 模板加入量不适合。 建议：在反应体系 10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时，可以降模 板浓度调节到低于10%的范围。 5. PCR 循环数不足。 建议：适当增加PCR 的循环数，推荐在35-40 循环为佳。因为模板复杂，一般PCR 反应要比用纯化的DNA 模板多5-10 个循环为佳。 ©Copyright Foregene 2014/02. All rights reserved. 1/3 FOREGENE Animal Tissue Direct PCR Kit Instruction Manual 非特异性扩增 1. 退火温度偏低。 建议：适当提高退火温度。或对退火温度做一个梯度摸索。 2. PCR 循环数过多。 建议：适当降低循环次数，推荐在35-40 循环为佳。 3. 引物浓度偏高。 建议：适量降低引物用量。通常引物终浓度为0.2μM 可以得到较好结果。反应性能 较差时，可以在0.1-0.5μM 范围内调整引物浓度。 4. 模板加入量过多。 建议：将模板加入量控制在 10-20% 。反应效性能较差时，可以降模板浓度调节到 低于10%的范围。 空白对照出现目的条带 1. 操作工具或试剂污染。 建议：实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入 加样枪内或溅出离心管外。 2. 样本间交叉污染。 建议：每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入 2% 的次氯酸钠溶液中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。 3. PCR 产物污染。 建议：如果实验室检测同类型样本多，最好使用UNG 防PCR 产物污染系统的试剂 盒进行实验。 ©Copyright Foregene 2014/02. All rights reserved. 2/3 FOREGENE Animal Tissue Direct PCR Kit Instruction Manual 中国·福际 World’s Foregene 成都福际生物技术有限公司 电话：028028 传真：028 Email：info@ zHttp:// ©Copyright Foregene 2014/02. All rights reserved. 3/3