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3 生物有机肥对烟田土壤的影响 3 生物有机肥对烟田土壤的影响 由于田间环境的复杂性，单独施入微生物菌剂受到外界温度，湿度，pH及优势土著微生物等条件的影响，拮抗菌定殖能力不强，不能大量繁殖形成优势群体，出现微生物菌剂在大田试验中效果不稳定的现象，本身具有的防治作用在很大程度上受到限制，不能够充分发挥。同时，由于生存在自然环境中的病原菌极易产生抗性，因此在制作生防菌剂时应该混合多种菌株，有效防止病原菌对某一种产生抗性。所以试验采用有机肥和拮抗菌剂混合二次发酵，以拮抗菌株为主，有机肥料为辅，综合使用进行防治烟草黑胫病的发生。拮抗菌在有机肥中大量繁殖后再施入田间，就可以避免单独施用肥料和拮抗菌剂所存在的问题。有机肥可以为拮抗菌提供大量的营养物料，有利于拮抗菌的定殖与繁殖，使得田间土壤中有益微生物大量增加，改善土壤的生态环境，产生多种活性物质和抗病物质，促进植物根系的发育，减少或降低作物病虫害的发生，从而能有效的防治土传病害的发生。 3.1 材料和方法 3.1.1 试验时间和地点 田间试验于2013年在四川省凉山州烟草分公司试验基地进行。 凉山烟区属于亚热带高原季风气候区，旱、雨季分明，冬半年日照充足，少雨干暖，夏半年雨量充沛，白天太阳辐射强，日照充足，光热资源丰富，均温在为16.9℃～25.6℃。大田生育期5～9月气温均在20℃以上，=10℃积温5329.9℃，且无霜期达到230～306天。年平均降水量在50.3 mm～286.5 mm，5月团棵期降水量较少，有利于促进根系发育；旺长期6、7月份，降水量在200 mm以上，利于烟株和叶片的生长，提高产量；成熟采收期8、9月降水量减少，利于烟叶正常落黄和香气物质的形成和积累[71]。 试验基地海拔1500 m，试验地地势平坦，肥力中等，该地区多年连作，土壤轮作困难，往年黑胫病发病相对严重。 3.1.2 试验材料 供试烟叶品种为红花大金元(简称“红大”)，该品种不耐涝但抗旱，在移栽到现蕾期黑胫病极易发生，属于高感烟草黑胫病的品种。采用漂浮育苗法进行育苗。试验所用烟草专用基肥N:P2O5:K2O比例为1:1:3，为烟草公司提供的烤烟专用复合肥。 固体拮抗菌剂的制备：分别将C13和Ty-3的拮抗菌菌悬液，与麦麸以500:1（mL/kg）的比例混合，搅拌均匀，30℃下培养3天。培养过程中定期搅拌，保证散热和有氧环境以供拮抗菌生长。待培养结束后，风干装袋备用。 生物有机肥制备：首先将油枯进行高温发酵腐熟后，再将已固体培养的拮抗菌剂按1:30的比例加入到腐熟油枯有机肥中进行二次发酵，水分含量50%左右，在自然温度下（25℃左右）静止2天后，即制成了具有生物防治功能的功能性生物有机肥，经检测表明制成的生物有机肥中拮抗菌的数量均达到106 CFU/g。 试验中选用的土壤调理剂为钙镁磷肥，钙镁磷肥除含有一定量的磷元素外，还含有大量钙、镁等中量元素，并且呈碱性，施入土壤后可以调节供试土壤的酸碱度，改善土壤的物理、化学和生物性质，使其更宜作物的生长。 3.1.3 试验方法 试验设计 大田试验选取肥力相对均匀、地势平坦、以往高发黑胫病的地块为试验田，4月20日移栽。 试验设置四个处理： 处理 施肥方式 T1 对照（按当地常规施肥方式和数量进行，有机肥施用腐熟油枯，30 kg/666.67 m2） T2 施用土壤调理剂（在对照基础上施用土壤调理剂，100 kg/666.67 m2） T3 施用生物有机肥（在对照基础上施用生物有机肥，折合油枯施用量仍为30 kg/666.67 m2） T4 施用土壤调理剂和生物有机肥(在对照的基础上，施用土壤调理剂100 kg/666.67 m2和生物有机肥，折合油枯30 kg/666.67 m2) 以上肥料均为移栽时穴施。 试验依照随机区组设计，大田共计为12个小区，每处理重复3次，每小区种植170株，植株密度1100株/666.67 m2，株距行距为0.5 m×1.1 m，大田面积为1236.34 m2。日常田间管理按照优质烟栽培技术进行。 根际土壤样品的采集 烟叶大田生长期间，按照烟草的生育时期采集根际土壤，即移栽期，团棵期，旺长期和成熟期，依照S形5点取样法取样，将烟株与根部土壤一同取出，去除一些大块土后，将粘连于细根上 的土抖落，即为烟株根际土壤；每个小区采集五个取样点土样混匀，并将其低温保存带回实验室待测。 烟草生育时期分类参考《中华人民共和国烟草行业标准YC/T142-2010