减毒活菌卡介苗对哮喘小鼠肺组织stat-上6表达的影响.docxVIP

广东医学院 硕士学位论文 减毒活菌卡介苗对哮喘小鼠肺组织STAT-6表达的影响 姓名：靳妮娜 申请学位级别：硕士 专业：@ 指导教师：吴斌 200905 减毒活菌卡介苗对哮喘小鼠肺组织STAT-6表达的影响中文摘要 减毒活菌卡介苗对哮喘小鼠肺组织STAT-6表达的影响 中文摘要 【目的】 本实验通过观察减毒活菌卡介苗(BCG)对哮喘小鼠气道炎症、n1和1他型 细胞因子、肺组织中信号转导和转录激活因子6(S似r-6)111]卧演含量以及Swm6 蛋白表达的影响，探讨BCG治疗哮喘的效果和原理，为BCG用于哮喘的治疗 提供理论依据。 【方法】 将入选的30只雌性昆明小鼠随机分为正常对照组(N组)、哮喘组(A组)、 BCG治疗组(B组)3组，每组10只。正常对照组：用生理盐水代替卵清白蛋 白(o、厂A)进行小鼠腹腔注射和雾化吸入；哮喘组以OVA致敏激发小鼠；BCG治 疗组于OVA致敏前及后5d分别以BCG皮内注射干预。所有小鼠在最后一次抗 原激发后24h被处死并收集标本，计数肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞总数及嗜 酸性粒细胞(EOS)数目，苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肺组织病理形态学改变， 用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中干扰素．Y(IFN—Y)、白细胞介素 4(IL-4)水平，以逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化学(m)法观察 各组小鼠肺组织中SWm6IIl】附A含量及STAD6蛋白表达。所得数据均使用统计 学软件SAS8．O进行统计分析。 【结果】 1小鼠哮喘模型的建立 小鼠经01vA致敏并激发后表现为呼吸急促、烦躁不安和腹肌抽搐等症状， 病理切片显示哮喘小鼠肺组织支气管黏膜水肿，黏膜上皮脱落，支气管及血管周 围大量炎性细胞浸润，以淋巴细胞和嗜酸性粒细胞(EoS)为主，肺泡腔也可见 散在大量炎症细胞，符合哮喘的病理改变，提示哮喘模型制备成功。 2小鼠气道、肺组织炎症的变化 病理学HE染色发现：正常对照组小鼠气道、血管周围及肺实质几乎无炎性 细胞浸润，上皮完整；哮喘组小鼠气道、血管周围均可见大量炎性细胞浸润，并 波及到肺实质，上皮脱落不完整；BCG治疗组小鼠气道及血管周围的炎性细胞 1 较哮喘组明显降低，上皮也基本完整。 较哮喘组明显降低，上皮也基本完整。 3小鼠BALF中自细胞总数及EOS计数的变化 哮喘组BALF中的白细胞总数、EOS计数较正常对照组明显升高(尸O．01)； BCG治疗组BALF中的白细胞总数、EOS计数仍高于正常对照组(p0．01)，但显 著低于哮喘组(pO．01)。 4小鼠勘让F中儿_4和IFN．Y水平的变化 哮喘组BALF中IL-4水平较正常对照组明显升高(PO．01)、IFN．Y水平较正 常对照组显著下降(PO．01)；BCG治疗组BALF中IL-4与IFN．Y水平仍分别高 于正常对照组俨0．05)，但BALF中IL_4水平较哮喘组明显下降(|PO．01)、IFN· Y水平较哮喘组显著升高俨0．01)。 5小鼠肺组织中STAT-6mRNA含量和STAT-6蛋白表达的变化 哮喘组小鼠肺组织中STAT-6mRNA含量和S吖m6蛋白表达较正常对照组明 显升高(P0．01)；BCG治疗组小鼠肺组织中S吖m6删[斟A含量和SW母6蛋白表 达仍分别高于正常对照组CP0．05)，但S似r-6IIl】烈A含量和S1猢№蛋白表达较 哮喘组显著降低(氏O．01)。 6小鼠BALF中EoS与IL-4水平的关系 小鼠BALF中EOS与IL-4水平呈显著正相关(n=30，，．=0．905，PO．01)。 7小鼠肺组织中sTAT-6蛋白表达与BALF中几4水平的关系 小鼠肺组织中STAT．6蛋白表达与BALF中IL-4水平呈显著正相关(n=30，， =0．824，氏O．01)。 【结论】 l Thl、Th2细胞因子的失衡可能在哮喘的发病中起作用；BALF中EoS水平的 增高可能与IL．4水平的增高有关。 2 s仉盯．删A及其蛋白表达的增加在哮喘的发病中起作用；BALF中IL4水 平的增高可能与肺组织Sn盯．6蛋白表达的增高有关。 3 BCG可能通过抑制STAT一6mRNA及其蛋白的表达、提高IFN．Y的水平，从而 达到抑制哮喘小鼠IL．4水平和气道炎症的目的。 【关键词】 支气管哮喘；卡介苗；信号转导和转录激活因子．6；白细胞介素．4；干扰素．Y 2 Ef．fect Ef．fect of Bacnlus Calmette—Guerin on the expression of signal transducer and ac饥ators of transcription 6 in asthmatic mice Abstract Iobiective】