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广州大学生命科学学院08生物工程2班 基因工程复习资料 第 PAGE 33页，共 NUMPAGES 34页 基因工程复习总结 第一章 基因工程：利用DNA重组技术，将目的基因与载体DNA在体外进行重组，然后把这种重组DNA分子引入受体细胞，并使之增殖和表达的技术 2基因克隆：在分子生物学上，人们把将外源DNA插入具有复制能力的载体DNA中，转入宿主细胞使这得以永久保存和复制的过程称为基因克隆。（基因工程或重组DNA技术则侧重于验证上述过程所获得遗传物质新组合在宿主细胞内的表达与功能鉴定） 3.重组DNA技术（RecombinantDNATechnique）是人类根据需要选择目的基因（DNA片段）在体外与基因运载体重组，转移至另一细胞或生物体内，以达到改良和创造新的物种和治疗人类疾病的目的。 4.基因操作：对生物体的遗传物质进行人为的操作，使之发生修饰和改变的过程。 5.遗传工程：用人工手段把一种生物的遗传物质转移到另一种生物的细胞中去，并使这种遗传物质所带的遗传信息在受体细胞中表达的技术。 遗传工程，也叫基因工程、基因操作或重组DNA技术。 说明基因工程的理论基石和技术基础 理论基石（三大发现）：DNA是遗传信息的载体；DNA的双螺旋机构模型及其半保留复制机理；中心法则和遗传密码及其通用性。 技术基础（三大发明）：DNA的体外切割和连接；载体和宿主的发现、改造和利用；DNA测序、电泳分离和分子杂交（Southern、Northern 和West Blot） 简述基因工程研究发展历史 1953，Watson和Crick阐明DNA的双螺旋结构 1961-1966，破译全部遗传密码 1971，获得第1个重组DNA分子（美国斯坦福大学的Paul Berg及其同事用限制性内切酶将大肠杆菌的DNA切开，并艰难的与病毒DNA连接，从而获得第一个重组DNA分子） 1972，合成了完整的tRNA基因；P.Berg首次构建DNA重组体 1973，Boyer和Cohen建立了 DNA重组技术 1977，重组人生长素抑制因子在大肠杆菌中成功表达 1978，美国Genentech公司在大肠杆菌中成功表达人胰岛素 1982，笫一个DNA重组技术生产的动物疫苗在欧洲被批准使用；美国批准重组人胰岛素上市 1988，PCR技术诞生：肿瘤敏感基因工程小鼠获美国专利授权 1990，第一个体细胞培养方案在美获准；人类基因组计划启动 1997，世界上第一只克隆羊问世；转录组学概念提出 2003，人类基因组计划的所有目标全部实现 2003，中国杨焕明等科学在京完成了对水稻（籼稻）基因组序 列的测定和初步分析 简述基因工程研究的主要内容。 1）克隆载体的研发 2）受体系统的研发 3）目的基因研究 4）工具酶 5）新技术研究（基因枪、放射性同位素探针、PCR等） 简述基因工程的主要应用领域 1）基因工程药物（重组活性多肽或蛋白、疫苗和DNA疫苗等） 2）转基因作物（抗病、抗虫、抗除草剂、抗逆及生物反应器等） 3）转基因动物（乳腺生物反应器） 4）工业（纤维素酶、酿造业菌株、抗菌素生产菌株的工程改造，等） 5）环保（生物降解塑料原料基因工程和生物防治农药污染基因工程等） 用5个词描述基因工程的过程。（找、剪、连、转、选） 第二章 天然DNA的制备 DNA变性：是指双螺旋区氢键断裂，空间结构破坏，形成单链无规线团状态的过程。 DNA复性：变性的DNA的互补链在适当条件下重新缔合成双螺旋的过程称为DNA的复性。 Tm值 ：将紫外吸收的增加量达最大量的一半时的温度值称为熔解温度（Tm） 举例说明浓缩DNA或RNA的方法。 ①乙醇沉淀法：在含阳离子的DNA溶液中，加入2倍体积的无水乙醇，使DNA沉淀。(采用的一价阳离子盐有NaAc、NaCl或NH4Ac，终浓度分别是0.25、1.0和2.0 mol/L；为了可提高小片段（小于 200 bp）的回收率，可用MgCl2(终浓度为 10 mmol/L)。)乙醇处理通常在4℃、10 min以上，若片段比较小(小于1kb)，或量比较少(少于0.l pg/ml)，则在－20 ℃甚至－ 70℃下沉淀，或延长沉淀的时间。此法沉盐，影响酶切。 ② 异丙醇沉淀法：在样品中加1倍体积的异丙醇，冰上10 min 以上，4 ℃下离心(12 000 g以上)10 min，干燥后溶入TE，－20℃ (RNA于－80 ℃)保存。此法不沉盐。 ③正丁醇抽提法：向DNA溶液中加入1倍体积的正丁醇，充分混匀，以1600 r/min离心l min，弃上相液体。如此重复至液体达到所需要的体积。然后用水饱和的乙醚抽提DNA溶液两次，去除正丁醇。最后在空气中蒸发乙醚。 ④聚乙二醇浓缩法：