2019年免疫细胞化学多媒体.pptVIP

; 第一节 免疫细胞化学原理 ★ 第二节 免疫细胞化学方法 ;; 免疫反应的特异性表现在： 抗原作为一类结构复杂的大分子能刺激机体 产生对其特异的抗体并与抗体发生反应 抗体针对某种抗原分子而产生的，特异地识 别该抗原并与其结合 ; 免疫细胞化学反应的原理：;;抗原;;; 抗 原： 凡能刺激机体产生抗体并能与 抗体特异结合的物质称为抗原 抗原性： 物质所具有的这种特性称为抗原性 ; 细胞中具有抗原性的化学成分有： 蛋白质 多肽 脂蛋白 多糖 脂多糖 糖蛋白 核蛋白 这些生物大分子都能用免疫细胞化学技术检测吗? 从生物学功能来看都包括了哪些物质? ; 酶、 受体、 抗体、 细胞外基质 激素、 细胞结构蛋白、病原体等 ; ;Fab片段 具有抗体活性，决定某种抗体 与抗原结合的能力和特异性; 免疫细胞化学技术中所用的抗体有两种： 抗 血 清 — 多克隆抗体，是用提纯的抗原 免疫动物后从动物血清制备得 到的 单克隆抗体 — 是指由单个产生特异抗体的 Ｂ淋巴细胞分化增殖形成的 细胞克隆产生的抗体 ; ; 免疫荧光技术将 荧光素作为标记物 使组织细胞中形成的抗原抗体复合 物在荧光显微镜下可见，从而显示 抗原物质的定位 ; １.异硫氰酸荧光素 ２.四乙基罗达明 ３.四甲基异硫氰酸罗达明 ４.藻红蛋白 ▲ 分子量不同 ▲ 最大吸收光谱不同 ▲ 最大发射光谱不同 ▲ 与蛋白结合方式不同 ▲ 呈现不同的荧光： 黄绿色荧光 橙色荧光 橙红色荧光等 ; 荧 光： 在激发光（荧光显微镜提供）的照射下，能发出较激发光波长更长的可见光并随照射停止而消失 荧光显微镜： 荧光显微镜的光源提供各种激发光，如 紫外光、蓝紫光（有不同的波长范围） 使受检标本内的荧光物质发光 ; 是将酶作为标记物使组织细胞中形成的抗原抗体复合物得到标记，再通过酶细胞化学反应产生显微镜下可见的显色物质，间接显示抗原物质的定位 ; 1.反应产物定位准确，颜色对比清晰 2.反应后标本材料可长期保存 3.能用于电镜观察 ;酶;酶标抗体法;;; 先获得抗酶抗体并将抗酶抗体与酶一起预先制成酶－抗酶抗体复合物 在反应中，由二抗的桥梁作用把复合物与一抗连接在一起 最后加入底物，从而达到用酶标记抗原抗体反应的效果;; ２.碱性磷酸酶（Alkaline phosphotase, AKP） ; 利用两种物质高度亲和力而互相结合定位特异分子 亲和物质 具有多价能力的物质，与亲和物质有高 度亲和力又能与抗体、蛋白质及各种标 记物(荧光素、酶、胶体金等)结合 最常用的亲和物质系统： 1、生物素（biotin）与亲和素（avidin） 两者结合能力为不可逆的 2、葡萄球菌A蛋白与免疫球蛋白IgG ; (1) 标记亲和素－生物素技术 （Labeled avidin biotin, LAB） (2) 桥式亲和素－生物素技术 （Bridged avidin biotin,BAB） (3) 亲和素－生物素-酶复合物技术 （Avidin-biotin peroxidase complex metho