去氧核糖核酸水解酵素之结构与功能.PDFVIP

行政院國家科學委員會補助專題研究計畫成果報告 ※※※※※※※※※※※※※※※※※※※※※※※ ※ 去氧核糖核酸水解酵素之結構與功能 ※ ※ Structure and function of deoxyribonuclease ※ ※※※※※※※※※※※※※※※※※※※※※※※ 計畫類別：個別型計畫 □整合型計畫 計畫編號：NSC93－2311－B－002－030－ 執行期間：93 年8 月 1 日至94 年7 月31 日 計畫主持人：廖大修 教授 共同主持人： 本成果報告包括以下應繳交之附件： □赴國外出差或研習心得報告一份 □赴大陸地區出差或研習心得報告一份 □出席國際學術會議心得報告及發表之論文各一份 □國際合作研究計畫國外研究報告書一份 執行單位：台大醫學院生物化學暨分子生物學研究所 中 華 民 國94 年 10 月 17 日 1 行政院國家科學委員會專題研究計畫進度報告 去氧核糖核酸水解酵素之結構與功能 Structure and function of deoxyribonuclease 計畫編號：NSC 93-2311-B-002-030 執行期限：93 年8 月 1 日至94 年7 月31 日 主持人：廖大修 台大醫學院生物化學暨分子生物學所 中文摘要 白。因此推測可能是 shNuclease 在 E.coli 中摺疊（folding）不正確所致。於是我們 蝦肝胰臟核酸水解酶 （shrimp 更換成哺乳細胞（mammalian cell）表現系 hepatopancreatic nuclease, 簡稱 統，同時為了使 shNuclease 能夠被偵測 shNuclease），之前被認為是一種 DNase 到，重新將 shNuclease 構築到具有 His I，它的最適 pH 值為 7.5，作用時需要二 tag 的 pcDNA3.1 myc-His 質體上，並在前 價金屬離子（鎂離子、錳離子及鈣離子） 端加上豬脾臟去氧核糖核酸水解酶 的信號 的活化，產物是帶有5’-磷酸根的寡核苷 胜肽，再於人類 293T 細胞進行表現。轉 酸，在和牛胰臟 DNase I 相同的作用條件 染含有 shNuclease 的質體後，收集細胞培 下，iodoacetate 烷化作用會對其酵素活性 養液，並製備細胞萃取物