浅谈基三质效应.pptVIP

基质效应的产生原因 所谓基质，指标本中除分析物以外的一切组成。以测定血中红霉素的浓度为例，除了红霉素之外的蛋白、磷脂及其他内源性物质皆为基质。基质效应，按美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）文件的定义为①? 标本中除分析物以外的其他成分对分析物测定值的影响；②? 基质对分析方法准确测定分析物的能力的干扰。广义说来，基质效应也应包括已知的干扰物（如红霉素测定中磷脂、血红蛋白、抗坏血酸等都是干扰物），但目前只将基质效应限于生物材料中未知或未定性的物质或因素（如粘度、pH等）的影响。 基质效应的产生原因 主要针对使用液相色谱-质谱联用技术分析生物样品中的化合物所产生的基质效应进行讨论。 而在生物样品（以血浆为例）中，引起基质效应的主要是磷脂、胆固醇等内源性物质。他们随同待测物从色谱柱上一起被洗脱出来，经离子源气化，进入质谱进行检测分析。而就在液滴气化、发生库伦爆炸变成小液滴直至产生气体离子的过程中，这些内源性的物质由于极性较大，会同待测物离子竞相竞争液滴表面，从而导致待测物的离子化效率降低或增强，引起响应降低或增高，这就产生所谓的基质抑制或基质增强效应。 另外，有学者建议使用低、中、高三浓度的质量控制样品（QC）来评价基质效应的大小；有人建议使用定量下限（LLOQ）水平的6个个体的基质来评价。 基质效应消除 我们在生物分析中主要用到沉淀蛋白法（PPT）、液液提取法（LLE）和固相萃取法（SPE）。PPT适应于绝大多数化合物，对蛋白结合率的高低没有要求，操作步骤相对简捷，缺点就是处理后的样品不是很干净，内源性物质较多，从而产生较强的基质效应；LLE适于极性相对小、蛋白结合率低的化合物，提取步骤相对繁琐，但处理后的样品尤为洁净；而SPE根据填料的不同，适于分析的化合物的种类也有所差别，目前市面上有SPE小柱和SPE 96-well板，该方法特点是样品处理后干净，操作装置简单，绝大数的内源性物质被去除，使待测物浓缩，提高检测的灵敏度。 请看下面两图，色谱条件优化前 色谱条件优化后 基质效应消除 从优化后的色谱图中，可以看出在4.2min左右有部分内源性物质的小峰出现，这说明如果化合物在这时候被洗脱下来，那么内源性物质就会一同下来，同时进入离子源，从而产生基质效应。为了避免这个问题，我们优化了色谱条件，将洗脱程序变缓，使内源性物质和待测得化合物分开，这样就减小了基质效应。 FDA关于基质效应的规定 FDA在生物样品分析方法确证中对基质效应的规定——凡是使用液质建立生物样品分析方法时，必须考察基质效应对化合物测定的影响。当基质的影响控制在LLOQ的20%以下，这个方法才能被接受。 内标物的选择 在生物分析中，由于样品处理过程复杂，为了保证其操作的准确性，要使用内标来校正操作的误差。内标的选择，主要从同位素标记物和待测物的同系物里寻找。实际上，同位素标记物是最为理想的内标物，它与待测物的化学性质极为相似，基质效应、操作中的环境变化等对他们的影响也一致，这样就可以出去基质效应的影响。但是由于同位素标记物价格昂贵，而且不易获得，使这种优越性大打折扣，在不得已的条件下，还需要选择同系物来做为内标，这就需要通过其他几个方面来尽量的降低基质效应，以满足测定灵敏度和专属性的要求。 基质效应消除 基质效应产生的原因 柱后灌注法的原理是什么 标准曲线法需要配制哪些样品 通过哪些方法消除或降低基质效应 问题 * * 浅谈基质效应 基质效应产生的原因和影响 基质效应的确认方法 基质效应的消除 浅谈基质效应 基质效应的产生原因 根本原因是什么？ 基质效应会产生哪些不好的影响 基质效应的产生原因 标准曲线法 柱后灌注法 监控法 基质效应的确认方法 样品配制方法：配制三种不同的标准曲线（每条标准曲线7个点，每一种配制方法五样本） 1、药物+内标：用流动相稀释到一定浓度 2、药物+内标：用含有5种不同来源的空白生物样品的流动相 稀释 3、正常配制的生物样品 标准曲线法 评价方法： 通过比较3组标准曲线待测组分的绝对响应值、待测组分与内标的响应值比值和标准曲线的斜率，可以确定基质效应对定量的影响。 标准曲线法 绝对响应值比较 第1组测定结果可评价色谱系统和检测器的性能以及整个系统的重现性。 第2组测定结果同第1组测定结果相比，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增加，表明存在基质效应的影响。 第3组测定结果，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增加，表明存在基质效应和提取回收率因血浆来源不同而不同的共同影响。 标准曲线法 绝对响应值比较 如果将第1组、第2组和第3组测得的相应的响应值分别用A、B、C表示，可按下列公式分别计算基质效应(ME)，提取回收率(RE)和方法效率(PE)： ME(％ )=B／A×100………… (1) R