生物工程下游技术第十四说章+电泳分离技术1.pptVIP

* * * * * * * * 實驗 P1 * 實驗 P1 * 說明文字 * 說明文字 * 說明文字 * * * * * * * * * 架膜 加盖 接导线，开机 3.醋酸纤维素薄膜电泳分离血清清蛋白 电泳仪器 实验操作： 浸泡 将醋酸纤维素薄膜在缓冲溶液中浸泡20min，取出识别光面和麻面。 点样 用镊子将薄膜置于滤纸上，吸收多余的液体，用铅笔在薄膜麻面一端2cm处画一细线，利用载玻片一侧蘸取样品，于细线处点样。 电泳 将薄膜麻面朝下，平悬于电泳槽支架的滤纸桥上，点样一端靠近负极；通电后先使U=80V，待10min后，使U=120V电泳40min。 染色 将薄膜取出后，置于氨基黑10B染色剂重染色10min。 漂洗 将薄膜取出后，移至漂洗液中，漂洗若干次，至无蛋白区无蓝黑色。 4.等电聚焦(Isoelectro focusing IEF or EF) 原理 Pr为两性电解质，不同Pr其aa的数量、种类及占比例不同，因此pI不同，pI范围窄且净电荷为零，因此依pI分离Pr。 EF是在凝胶中加两性载体电解质，通直流电后，可形成从阳极到阴极逐步增加的pH梯度(连续的、稳定的、线性的pH)。 原理（续） 当Pr在电场中迁移到它的PI时，由于净电荷为零，不再移动。 如扩散，附近的凝胶会使其荷电，阳、阴