实验9,10题酶切和连接.pptVIP

5）取回收试剂盒中吸附柱EC装在2ml收集管上，将上一步所得溶液加入吸附柱EC中。室温放置1min, 12000rpm离心1min,弃去收集管中平衡液，将柱子套回； 6）加入700ul 漂洗液WB(乙醇已溶解)，12000rpm离心1min ，弃去废液； 7）加入500ul 漂洗液WB(乙醇已溶解)，12000rpm离心1min，弃去废液； 8）将吸附柱EC装回收集管上，12000rpm离心2min 甩干柱子中残液； 9）将吸附柱转移到1个干净的1.5ml eppendorf 管中，加入50ul 洗脱缓冲液EB至柱子底部膜中央，室温放置2min, 12000rpm离心1min，收集离心液为洗脱的DNA. 2. 片断与载体连接反应 1）连接反应液的制备： 加入 含有质粒载体的DNA溶液： 2 μl； 插入片段DNA溶液： 5 μl； 10X T4 DNA ligase buffer： 1 μl； T4 DNA连接酶： 0.5 μl 灭菌的双蒸水： 1 .5 μl 总体积为10μl 涡旋后混合均匀，涡旋至无气泡。