水稻草状矮缩病毒P2基因多克隆抗体的制备及应用.PDFVIP

中国农学通报 2012,28(30): 1-5 Chinese Agricultural Science Bulletin 水稻草状矮缩病毒P2 基因多克隆抗体的制备及应用 杨 靓，邓 萍，王开放，刘 妍，刘小娟，吴祖建 （福建农林大学植物保护学院/福建省植物病毒学重点实验室/福建农林大学植物病毒研究所，福州350002） 摘 要：为了进行水稻草状矮缩病毒(Rice grassy stunt virus, RGSV)诊断方法和蛋白功能研究。通过 RT-PCR 方法从感染RGSV 的水稻中克隆该病毒的P2 基因，并将此基因片段重组到原核表达载体 pDEST 17上。将重组载体转化E. coli Rosetta ，经IPTG 诱导后获得分子量约为29 kDa 含HIS 标签的融 合蛋白。以诱导的融合蛋白为抗原，免疫新西兰大耳白兔获得多克隆抗体，经酶联免疫检测发现其效价 达到l:8192。并用制备的抗体建立了特异、灵敏的检测RGSV 的IC-RT-PCR 和Dot-blot ELISA 方法，为 该病毒的检测、诊断提供了保障，同时也为P2 蛋白的结构和功能研究奠定了基础。 关键词：水稻草状矮缩病毒；P2 基因；原核表达；多克隆抗体 中图分类号：S432.1，S432.4 文献标志码：A 论文编号：2012-2714 Polyclonal Antibody Preparation and Application of P2 Gene of Rice grassy stunt virus YangLiang,DengPing,WangKaifang,LiuYan,LiuXiaojuan,WuZujian (KeyLaboratoryofPlantVirologyofFujianProvince,InstituteofPlantVirology,CollegeofPlantProtection, FujianAgriculturalandForestryUniversity,Fuzhou350002) Abstract: P2 geneof Ricegrassy stunt viruswasamplifiedbyRT-PCRfromtheinfectedriceleaves,andit wassubclonedintoprokaryoteexpressionvectorpDEST17toconstructrecombinantexpressionplasmid,which thenwastransformedintoE.coliRosetta.The29kDaHIS-tagfusionproteinwasobtainedwithinductionof6 IPTGfromE.coliRosettacells,whichwasusedtoimmunizethehealthyrabbitsasanantigen.Theantiserum ofP2 proteinwasobtainedafterfivetimesinjectionsandtheELISAanalysesshowedthatthepotencyof antiserumwas 1:8192.Then,theantiserumwasusedtoestablishtheImmunocaptureRT-PCRandDot-blot ELISAmethodtodetecttheRGSV.Therefore,theP2proteinandantiserumprovidedthetechnicalsupportfor thediagnosisofRGSVdiseaseandproteinfunctionstudy. Key words: Ricegrassy stuntvirus;P2gene;prokaryoticexpression;polyclonalantibody 0 引言 水稻后，表现出的典型症状为病株严重矮化，分蘖增 水稻草状矮