《灵芝多糖提取方法的研究》-毕业设计（论文）.doc

PAGE PAGE 7 灵芝多糖提取方法的研究 天津市医药职工大学 摘要：将各种中药处理新技术应用于灵芝多糖的提取研究，并筛选出最佳提取工艺条件。通过对回流提取法、微波提取法、超声提取法、酶解-回流提取法4种方法进行对比，得出灵芝多糖提取的最佳方法：酶解-回流提取法。再蚁媒用量，料液比，酶解温度，提取温度等对酶解-回流提取法进行单因素试验，初步确定各因素的最佳范围。通过进一步的正交试验，得出最佳工艺条件为以水为溶剂，料液比1∶12，20 μl/g(相对灵芝干重)植物复合水解酶，50℃酶解1.5 h，100℃提取2次。结论：灵芝多糖提取的最佳方法是酶解-回流提取法，而且采用酶解辅助提取灵芝多糖，可以明显提高多糖的提取率。 ??? 关键词：灵芝；多糖；提取；酶解 前言：灵芝多糖是由10个分子以上的一种或多种单糖连接而成的大分子化合物［1］是一切生命机体必不可少的成分，具有多种生物活性。有文献［2］报道灵芝多糖对机体具有令人满意的免疫增强作用。还有报道显示，灵芝多糖对异常增高的血糖有降低作用，而且可以减少放射性物质对机体的损害，促进机体核酸和蛋白质的合成。据文献［3］报道，生物酶解技术、超临界流体萃取技术、微波技术、超声波技术等已广泛应用于中药有效成分的提取工艺中。目前，关于灵芝多糖提取工艺研究的文献报道较少，张仁权等［4］报道了灵芝多糖的提取及含量测定，但并没有对灵芝多糖提取工艺进行优化筛选。本次将生物酶解技术、微波技术、超声波技术应用于灵芝多糖的提取工艺研究，通过对4种提取方法的综合比较，确定最佳提取方法，然后对其进行工艺优化筛选，得出最佳提取工艺参数，可为灵芝多糖的结构表征、活性功能实验以及灵芝多糖产品的工业化生产奠定基础。 一、灵芝多糖成分和结构： 1．灵芝多糖是灵芝叶片中主要功能性成分。灵芝叶中的多糖由甘露糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖组成，其相对含量甘露糖为60.73％，半乳16.42％，，阿拉伯糖5.45％，鼠李糖4.42％葡萄糖9.16％，木糖3.83％。 用两万分子量以上的灵芝多糖进行免疫功能等项药理实验，在5mg/kg的浓度下，具有促进免疫功能的作用。从灵芝叶中分离得到三种多糖：A60b，A90a，A90b，分子量分别是12000，47000和12000。A60b的结构为β-(1→4)连接的甘露聚糖，在2,3或6位上部分乙酰化。A90b的结构为β-(1→4)结构的直链俯萄--甘露聚糖。实验证明Aloe china中灵芝多糖的含量较高。另外，对Aloe Arborescens与Aloe china的碳水化合物的组成进行比较分析，Aloe china中除了多含有葡萄糖醛酸外，和Aloe Arborescens一样均含有可溶性糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖和微量木糖。两种灵芝多糖的组成Aloe Arborescens是以半乳糖为主，还有甘露糖、葡萄糖和阿拉伯糖组成的中性杂多糖；而Aloe vear是以甘露糖为主，其次为半乳糖、葡萄糖、和阿拉伯糖组成的酸性杂多糖。南斯拉夫科学家对Aloe Arborescens中酸性多糖进行了较为深入的研究，发现它是由D-葡萄糖和D-葡萄糖醛酸以9：1分子比组成的分枝多糖。也有人指出，Aloe Arborescens中的主要多糖为部分乙酰化的葡萄-甘露聚糖，其分子量为1,5000左右，并指出这种多糖对S-180有抑制作用。Gowda等人报道Aloe vear中至少存在四种多糖，都是不同程度乙酰化的葡萄-甘露聚糖。对分离得到的免疫调节活性多糖进行了细致的结构分析，结果表明此类多糖的主链主要是由Man:Glc:Gal:GalA:Fuc:Ara:Xyl以120：9：6：3：2：2：1的比例组成的以及痕量的4,6-Galp和3,6-Galp；水解后得到的产物主要是短链的低聚糖和一抗酸片断的混合物。总之，科学家试图通过灵芝多糖结构的精细研究揭示其结构与功能之间的构效关系。 2、灵芝叶的新鲜汁液含灵芝大黄素、灵芝大黄素苷、异灵芝大黄素苷、对香豆酸、少量蛋白质及许多草酸钙的结晶。各种灵芝属植物皆含蒽醌衍化物。 灵芝大黄素(Aloeemodin),灵芝大黄素苷(Aloin,barbaloin),为淡黄色结晶性苷，灵芝泻素蒽酚或灵芝泻素蒽酮，灵芝大黄素苷的异构体异灵芝大黄素苷(Isobarbaloin),高塔尔灵芝素(Homonataloin)，，蒽酚(Anthranol) 大黄酚(Chrysophanol),大黄酚葡萄糖苷(Chrysophanolglucoside)等蒽类及其甙类，以及榭皮素(Quercetin),莰非醇(Campherenol),芦丁(Rutin)等黄酮类和亦含有精氨酸，天冬酰胺，谷氨酸等人体必需的八种氨基酸，以及胆固醇(Cholesterol),菜油醇(Fru