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影响血液凝固的因素 【实验目的】 观察某些因素对血液凝固的影响 【实验原理】 血液凝固过程中必须较多因子的参与，因此血液凝固受许多因素的影响，除凝血因子可直接影响血凝过程外，血凝还受接触面、温度等影响。 血液凝固(blood coagulation) 概念：血液从流动的溶胶状态转变成不能流动的凝胶状态的过程 本质：可溶的纤维蛋白原变为不溶的纤维蛋白并交织成网，网罗血细胞等成分形成凝血块。 血液的凝固是由一系列凝血因子参与的复杂的蛋白质酶解过程 血浆和血清： 血清中缺乏凝血因子和纤维蛋白原，但增加了少量凝血过程中血管内皮和血小板释放的物质。 【实验对象】 家兔 【实验器材与药品】 哺乳动物实验手术器械一套、20ml注射器1副、小烧杯2个、竹签、清洁小试管6支、水浴装置一套、冰块、棉花、石蜡油、滴管、肝素、草酸钾、0.025mol/LCaCl2溶液、肺组织浸液、富血小板血浆、少血小板血浆、生理盐水 【实验步骤和观察项目】 1.麻醉：1.5%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，剂量2ml/kg体重 2.固定、备皮 气管插管 3. 手术 颈总动脉插管。 4.做好准备工作：按下2表做好各试管的准备、人员分工、计时等。 表一 影响血凝的理化因素 实验条件????????????? 凝血所需时间 加棉花少许 用石蜡油润滑试管表面 保温于37℃水浴糟中 ?? 放置于冰浴糟中 加肝素8单位(加血后摇匀) 加草酸钾1～2mg(加血后摇匀) 5.取血：打开动脉夹，经颈动脉插管放血入各试管，每支试管各采血约1.5ml(一定要一次性采血完毕，多次放血可能会出现血液凝固于插管内而不能再放血)，注意及时计时并将各试管尽快置于其实验条件下，如摇匀、放入温浴槽、冰浴槽内等。 6.实验观察 每隔30s将各试管轻轻倾斜一次，观察其中的血液是否已凝固，发现其中的血液已呈凝胶状而不再流动时记录其时间，最后计算出各试管血液凝固所需的时间(在本实验条件下，如超过30分钟血液仍未凝则视为“不凝”)。 观察内源性凝血、外源性凝血过程以及血小板对血液凝固的影响，取干洁小试管3支，按表1-1 加入各种成分，摇匀，最后再加入0.025mol/CaCl2溶液并同时开始计时，静置，第一管、第二管每15s倾斜一次， 第三管每隔5s倾斜一次，观察器中的血浆已不能流动即已完全凝固，并分别记录三个试管的血浆凝固时间。 表二 内源性和外源性凝血的观察 试剂 ???????????? 试管号 1 2 3 富血小板血浆(ml)? ??? ?0.2? 少血小板血浆ml)?????????????? ? 0.2??????? 0.2?? 生理盐水 (ml)???????? 0.2???? ?0.2? ?? 肺组织浸液(ml)??????????????????????????????? 0.2? 0.025mol/LCaCl2溶液?? 0.2?? 0.2??????? 0.2? 血浆凝固时间??? 【分析讨论】 1.表一： (1)比较第一管（放棉花管）与第二管（石蜡油润滑管）内血液凝固的速度，并分析产生区别的原因。 (2)比较第三管（37℃管）与第四管（冰浴管）内血液凝固的速度，并分析产生区别的原因。 (3)分析第五管与第六管内血凝方面发生变化的原因。 表二： 1.纤维蛋白原在凝血过程中有何作用？ 2.血小板在凝血过程中有何作用？ 3.内源性凝血和外源性凝血的主要区别在哪里？ ? * 凝血因子(coagulation factor) 凝血因子是无活性酶原，有限水解才具活性。 除Ⅳ因子(Ga2＋)外其余多为蛋白质，在肝合成，其中Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的合成必须有VitK参与。 Ⅲ存在于组织中，其它因子均在血浆中。 Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ都是丝氨酸蛋白酶，能对特定肽链有限水解。 Ⅲ、Ⅴ、Ⅷ在反应中起辅因子的作用，可使相应丝氨酸蛋白酶凝血因子的催化速率增快上万倍。 不能从肾小球滤过，降解和失活在肝脏完成。 凝血因子 内源性激活途径 （Ⅻ） 外源性激活途径 （Ⅲ） 凝血酶原激活物 凝血酶原 凝血酶 纤维蛋白原 纤维蛋白 血液凝固的过程 表面激活 + 外源性凝血途