Beclin-1和mTOR基因在人脑胶质瘤中的表达及意义.pptVIP

人脑胶质瘤是来源于神经上皮的中枢神经系统最常见的原发性脑肿瘤，多呈浸润性生长，手术不易全切，治疗效果差。目前治疗方法仍是手术治疗为主辅以放、化疗的综合治疗，虽然在其诊疗方面有了很大进展，但患者的预后依然很差。 近年来随着分子生物学在肿瘤研究中的进展，肿瘤的靶向治疗已成为肿瘤研究领域的重要课题。因此，寻找人脑胶质瘤新的治疗靶点成为当前基因治疗的重点。 Beclin-1基因是十多年来发现的与细胞自噬相关的一个候选抑癌基因，通过促进自噬、诱导凋亡进而抑制肿瘤的发生发展，已经证实在多种肿瘤中Beclin-1基因表达异常。Beclin-1基因主要是通过Ⅲ型磷脂酰肌醇3-激酶形成一个复合体调节其他ATG蛋白定位于自噬前体结构，调节自噬活性。 Beclin-1蛋白结构域及其相互作用因子 Beclin-1与其相互作用因子示意图 mTOR (mammalian target of rapamycin)是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白。在多种细胞的生长、增殖及存活过程中起着重要的作用，如神经肌肉再生、胰岛素信号传导以及多种肿瘤的形成。 当前认为，在调控自噬促进细胞存活的调控机制中，Beclin-1 介导的自噬/凋亡互反馈作用机制及mTOR介导的自噬与mTOR的互反馈调控作用成为重要的途径。 本实验的主要目的在于研究自噬相关基因Beclin-1和mTOR在人脑胶质瘤中的表达情况，且与胶质瘤病理级别之间的关系及其相关性，进一步探索人脑胶质细胞瘤增殖及侵袭的分子机制，可能为临床诊疗提供新的思路。 创新点及不足之处 创新点：在分子水平下，研究人脑胶质瘤及正常脑组织Beclin-1与mTOR的表达情况及其相关性，国内外相关研究较少。 不足之处：由于实验本身及个体差异性导致的误差，对结果产生一定的影响，可以通过进一步动物实验及扩大基础临床研究减少误差。 研究对象 脑胶质瘤标本取自郑州大学第二附属医院神经外科2012年7月-2013年8月43例手术标本，其中男23例，女20例，年龄6-69岁，平均39.72±18.24岁。所有切片均按照WHO脑肿瘤分类标准进行病理分级，其中低级别组（Ⅰ级2例、Ⅱ级20例）22例，高级别组（Ⅲ级12例、Ⅳ级9例）21例。另取11例来自同期收治的脑外伤或脑出血患者的非瘤脑组织标本作为对照组。 纳入标准 所有病例均为首发病例； 且术前均未行放疗、化疗及免疫治疗； 均有完整的临床资料； 术后均经病理证实为脑胶质瘤 ； 离体标本半小时内转至–80℃深低温冰箱冻存备用。 研究方法 研究对象入院后取得本人同意，术中留取离体标本–80℃深低温冰箱冻存备用。采用RT-PCR及免疫组化SP法检测了43例脑胶质瘤和11例非瘤脑组织中Beclin-1和mTOR基因mRNA及蛋白的表达情况。 RT-PCR 免疫组织化学染色 RT-PCR琼脂糖凝胶电泳判定标准 阳性判定标准为：Beclin-1、mTOR的RT-PCR产物凝胶电泳后在紫外灯下分别出现318bp、285bp的荧光条带；GAPDH内参628bp的荧光条带。 免疫组织化学染色结果判定 400倍视野下随机挑选10个视野，计数镜下细胞500个 统计学处理 采用SPSS 17.0软件进行数据处理，两组定量资料的比较采用两独立样本t检验，多组定量资料的比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验；两样本率的比较采用四格表资料的χ2检验，差异性分析采用配对χ2检验；相关性分析用Pearson关联性检验。以α = 0.05作为差异显著性检验水准。 3.1 Beclin-1在脑胶质瘤及非瘤脑组织中的表达 琼脂糖电泳结果显示，在318bp处可见Beclin-1条带，且非瘤脑组织Beclin-1条带亮度明显高于胶质瘤的条带亮度，统计学分析示Beclin-1 mRNA在非瘤脑组织与胶质瘤组织（t=10.853，p＜0.05）存在显著统计学意义，而且非瘤脑组织与低级别组、高级别组（F=92.445，p=0.000＜0.05）之间的表达存在显著统计学意义，经LSD-t检验示两两之间均存在统计学差异（p=0.000＜0.05）。 Beclin-1蛋白阳性表达率经统计学分析处理示非瘤脑组织与胶质瘤组织（X2=6.856，p=0.009＜0.05）、低级别组和高级别组（X2=3.909，p=0.048＜0.05）均存在显著统计学意义。 3.2 mTOR在脑胶质瘤及非瘤脑组织中的表达 琼脂糖电泳结果发现，在285bp处可见mTOR条带，且非瘤