基因转染上调表达smad7对大鼠腹膜炎模型局部炎症的影响-内科肾脏病学专业论文.docxVIP

薹堕壁鲞圭塑墨垄!竺型!墅查垦竖堕壅塑型曼型叁蕉竺丝堕———』旦墨塑i墨一基因转染上调表达Smad7 薹堕壁鲞圭塑墨垄!竺型!墅查垦竖堕壅塑型曼型叁蕉竺丝堕———』旦墨塑i墨一 基因转染上调表达Smad7 对大鼠腹膜炎模型局部炎症的影响 专 业：内科肾脏病学 博士研究生：王欣 导 师：余学清教授 中 文摘要 终末期肾功能衰竭(ESRD)的替代治疗主要包括透析和肾移植。由于供体 肾来源有限，使得透析仍是ESRD的主要替代治疗手段。近年来，尽管腹膜透析 技术的不断进步。使腹膜透析相关性腹膜炎的发生率显著下降，但腹膜炎仍然是 导致腹膜纤维化乃至腹膜透析失败的主要原因。因此，研究腹膜炎发生的分子机 制以及与腹膜纤维化的关系，对有效防治腹膜透析相关性腹膜炎和腹膜纤维化具 有十分重要的科学价值和临床意义。 研究证明细菌入侵或迁移至腹腔以及腹膜透析液的生物不相容性，包括低 pH值、高浓度葡萄糖和葡萄糖降解产物(GDP)等，都可导致腹膜的炎症。这 可能与这些不利因素直接刺激腹膜组织，以及激活腹膜的固有细胞与浸润的炎症 细胞释放大量炎症介质、趋化因子和生长园子等有关。虽然抗生索的治疗能有效 地杀灭细菌，但却不能阻断已经激活的炎症介质和细胞因子的瀑布链式反应。因 此，探索炎症反斑所致的细胞因子瀑布链式反应及其分子机制，具有重大的科学 意义和临床实用价值。 TGF．B l／Smd与NF．K B信号通路是参与调节炎症反应的两大信号系 统，在炎症反应过程中均可高度活化，但其功能相反：TGF．8 1／Smads信号系 统的活化下调炎症反应韵水平；而NF．x B信号系统的活化上调炎症反应的水平。 有研究表明，TGF．el／Smad与NF．KB信号通路通过多种机制相互调节。～方 面，活化的NF--KB通过与R-Smad竞争共激活子p300，对TGF．t3 l／Smad信 基因转染上调表达Smad7对大鼠腹膜炎模型局部炎症的影响 基因转染上调表达Smad7对大鼠腹膜炎模型局部炎症的影响 中文摘要 号通路产生竞争性抑制的作用；而NF．x B信号通路的活化，又上调表达TGF- 13 l／Smad信号通路中的抑制性蛋白Smad7，后者通过与Smad竞争与TGF—B 受体l(T昼R I)的结合以及降解T昼Rl两种方式来掷制TGF—e l／Smad信 号通路的活化；另一方面，TGF．B 1还可以上调I B的基因表达和蛋白水平， 进而抑制NF．K B的活化，而TGF．B l／Sraad信号通路的抑制性蛋白Smad7还 能够通过抑制IKB的降解来抑制NF．KB的活化。 已经证明，TGF．0 1／Smad信号通路的活化在组织器官纤维化的发生发展 过程中起着关键性作用，而Smad7是TGF一13 l／Smad信号通路的抑制性蛋白， 因此，上调表达Smad7可以抑制纤维化的发生。目前已经在肺纤维化、肝纤维 化、肾纤维化以及皮肤纤维化等动物模型中证实：Smad7的上调表达可以显著地 减轻组织的纤维化并减轻纤维化过程中的炎症细胞浸润。TGF．B 1也是重要的免 疫调节因子。上调Smad7的表达抑制TGF．S 1／Smad信号通路的活化，对炎症 方面的影响目前尚有争议，而其在腹膜炎症方面的作用尚无研究报道。 我们通过建立大鼠急性细菌性腹膜炎的模型，应用超声微泡介导的质粒转 染方法上调Smad7在大鼠腹膜组织的表达，探讨Smad7在腹膜炎症中的作用和 可能机制，以及对腹膜功能的影响，为I|岛床防治腹膜透析相关性腹膜炎以及腹膜 纤维化提供实验依据。 一大鼠急性细菌性腹膜炎模型的建立 目的：建立腹膜透析相关性腹膜炎的动物模型，为迸一步研究腹膜炎症反应中细 胞内信号蛋白的作用机制奠定基础。 方法：1．确定建立大鼠急性细菌性腹膜炎模型的E．Coli浓度：II级雄性SD大鼠 60只随机分为6组，对照组给予灭菌PBS 50ml／kg体重(Bw)腹腔注射，其 余5组分别给予E．Coli ATCC 25922 3．3x104 efi．gkgBW、3．3x107 cfu／kgBW、 3．3x1050fu／kgBW、3．3x10’cfu／kgBW、3．3x1010cfag kgaW腹腔注射，均在72h 杀检，观察大鼠死亡率，行血和腹水白细胞计数、腹膜病理检查。2．大鼠急性细 菌性腹膜炎的动态观察：Ⅱ级雄性SD大鼠112只随机分入对照组和模型组，对 照组56只给予灭菌PBS 50mVkgBW腹腔注射，模型组56只给予E．Coli 3．3×108 II 苎堕簦鎏占塑垂望!竺塑!翌查塾堡堕壅堡型旦塑壅蕉塑星堕 苎堕簦鎏占塑垂望!竺塑!翌查塾堡堕壅堡型旦塑壅蕉塑星堕 一生皇煎呈一 cfit／kgB