基因佐剂促进不同乙肝疫苗诱导的免疫应答的动态学研究-病原生物学专业论文.docxVIP

塑主兰堡丝塞——————主苎!!兰博士学位论文中文摘要 塑主兰堡丝塞——————主苎!!兰 博士学位论文中文摘要 基因佐剂促进不同乙肝疫苗诱导 免疫应答的动态学研究 全球约有4亿的乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染者，其中许多人发展为慢性 肝脏疾病如肝硬化、肝癌等。由于目前尚无针对HBV持续性感染的有效药物，因 此治疗性疫苗成为抗HBV感染领域中的一个研究热点。传统的蛋白疫茁诱导以 IgG抗体为主的体液免疫应答，对慢性乙肝病毒感染作用有限。DNA疫苗能诱生 较强的特异性CD8+T细胞应答，但在大型哺乳动物和人类中所诱导的免疫应答强 度相对较低。基因佐剂与疫苗共免疫是增强机体对疫苗的免疫应答或改变免疫应 答类型的策略之一。本文拟研究不同基因佐剂对乙肝蛋自疫苗和DNA疫苗诱导 的免疫应答的促进作用进行初步探讨。 已知典型的T细胞免疫应答分为三个期：(1)效应期(2)凋亡期(3)记忆期。基 因佐剂通常着眼于疫苗诱导的T细胞免疫应答的三个时期，或是增强效应期T 细胞扩增，或是减少效应期T细胞的凋亡，或是促进记忆性T细胞的形成，以 增强疫苗的免疫效果。 在T细胞免疫应答的效应期，T细胞的数量和质量首先取决于抗原递呈细胞 (APC)呈递给T细胞的信号。由于树突状细胞(DC)是体内功能最强和最重 要的抗原递呈细胞，能够显著活化初始T细胞迸行增殖，因此增强DC的功能是 增强治疗性疫苗效果的策略之一。细胞因子Flt3配体(FL)是影响DC的功能 和数量的重要因素之一，可促使淋巴系来源的DC和髓系来源的Dc大量扩增， 因此FL作为基因佐剂时，可能对疫苗诱导的免疫应答的效应期产生影响。 在T细胞免疫应答的记忆期，IL．15是记忆性CDS+T缅胞产生和维持的关键 因子。它是唯一能在体外直接诱导记忆性CD44“CD8’T细胞增殖的细胞因子。 因此IL．15作为基因佐剂，可能对疫苗诱导的免疫应答的记忆期产生影响。 本论文以FL作为影响疫苗诱导的免疫应答效应期基因佐剂的代表，以IL．15 作为影响影响疫苗诱导的免疫应答记忆期基因佐剂的代表，重点研究了基因佐剂 对乙肝蛋自疫苗和乙肝DNA疫苗诱导的免疫应答的动态学影响。 第一章 乙肝病毒核心抗原DNA疫苗诱导小鼠抗原特异性C08’细胞应答的 动态研究 博i。学位论文 博i。学位论文 中文摘要 为研究HBcDNA疫苗诱导的CD8+T细胞应答的动态变化，将HBV核心抗 原(HBcAg)N端144个氨基酸的重组真核表达质粒DNA(简称pHBcl44)免 疫小鼠，利用细胞内细胞因子染色技术在DNA疫苗免疫后不同时间点定量检测 小鼠的脾脏和PBMC中抗原特异性CD8+T细胞(CD8+WN—Y+)占CD8+T细胞 的百分比。结果显示：初次免疫后第8天，小鼠脾脏内0．10％±0．04％的CD8+T 细胞是抗原特异性CD8+T细胞，随后抗原特异性CD8+T细胞占CD8+T细胞的 百分比逐渐上升，初次免疫后第14天，DNA疫苗诱导的特异性细胞免疫应答达 到高峰，抗原特异性CD8+T细胞占CD8+T细胞总量的1．84％±0．56％，此后抗 原特异性CD8+T细胞所占百分比逐渐减少，到初次免疫一年后抗原特异性CD8+T 细胞仍占CD8+T细胞的O．28％±0．05％。加强免疫后第10天达到高峰，约占 CD8+T细胞总数的3，60％±0．35％，约是初次免疫高峰的2倍，此后抗原特异性 CD8+T细胞的百分比再次回落，但下降的速度减缓，加强免疫后第30天抗原特 异性CD8+T细胞仍占脾脏CD8+T细胞的1．17％±0．78％，明显高于初次免疫第 30天抗原特异性CD8+T细胞的百分比，直至加强免疫后第60天抗原特异性 CD8+T细胞的百分比才回落至O．63％。 PBMC中IFN．Y+CD8+T细胞动态变化的趋势与脾脏特异性CD8+T细胞变化 趋势相似，在初次免疫后第8天，小鼠外周血HBcAg特异性CD8+T细胞占总 CD8+T细胞的百分比低于检测水平(O，1％)，初次免疫后第14天为特异性细 胞免疫应答的高峰期，抗原特异性CD8+T细胞占外周血总CD8+T细胞的0．23％ ±0．2l％，此后抗原特异性CD8+T细胞占总CD8+T细胞的百分比逐渐减少，到 初次免疫一年后小鼠外周血HBeAg特异性CD8+T细胞占总CD81细胞的百分 比低于检测水平(O．1％)，加强免疫后第10天再次出现免疫应答高峰，抗原特 异性的CD8+T细胞