乳酸菌数量测定.docVIP

乳酸菌数量测定 1、目的 通过试验，测定乳酸菌的含量，看乳酸菌的是否符合工厂出厂标准（1.5×108）。 2、试验材料 2.1、菌种：发酵罐、待出货样品 2.2、试剂配置 生理盐水：陈总办公室饮水机温水500ml+ 4.5gNaCl（实验室的电子天平的精确度为0.01g，所以称4.50g、4.51g都行） 225ml生理盐水：用250mL的量筒量取225mL生理盐水 稀释用的生理盐水：2个样品×7个稀释度=14根试管，用10mL的移液管移取9mL生理盐水 MRS培养基：2个样品×3个稀释度×2个平行×15ml培养基=180ml培养基≈200ml培养基；陈总办公室饮水机温水200ml+12.86gMRS培养基（由于琼脂的凝固效果不太好，所以要多加培养基，培养基的量为13.40g - 13.60g） 2.3实验器材： 培养皿：2个样品×3个稀释度×2个平行=12个对扣培养皿 “L”型涂布棒：2个样品×3个稀释度=6根“L”型涂布棒 10mL移液管：2个样品=两根移液管 3个500mL的三角瓶、1000uL枪头一盒、100uL的枪头一盒、移液枪、2个饭盒、两个蜡烛、两个瓶盖、两个易拉罐罩子、75%酒精棉、试管架、“L”型涂布棒 3、实验步骤 1、计算实验要用的基本培养基、培养基。 2、配试剂，NaCl可以用白纸来称，MRS培养基直接用三角瓶来称，调MRS培养基至6.2±0.05 3、 用报纸把实验器材（3个500mL的三角瓶、1000uL枪头一盒、100uL的枪头一盒、10mL的移液管、20个对扣培养皿、2组的7根试管、“L”型涂布棒）包好，然后灭菌（121℃、20min），这个过程大概花费1h~1.5h左右。 4、当高压蒸汽灭菌锅鸣声，显示“END”的时候，把高压蒸汽灭菌锅的电源开关关了，然后打开单人无菌操作台的紫外灯对单人无菌操作台进行杀菌消毒，然后把门依次关好，然后到实验室把无菌室的紫外灯打开，对无菌室进行杀菌消毒。紫外杀菌过程一定要30min以上。 5、当高压蒸汽灭菌锅的压力指数为“0”时，然后打开高压蒸汽灭菌锅，用毛巾把里面的篮子提出来，把里面的东西捡出来，把东西均匀的分开，一遍冷却。对于2个225mL的生理盐水、200mL的MRS培养基，可以放到水里进行冷却，放在水里大概15min左右。 6、用100mL的三角瓶取样品，然后测定PH、和温度。 7、冷却好了，把东西（灭菌篮（3个500mL的三角瓶、1000uL枪头一盒、100uL的枪头一盒、10mL的移液管、20个对扣培养皿、2组的7根试管、“L”型涂布棒）、待测样品、1000mL大烧杯）放到传送窗里，然后人从无菌室的门进去，在第一个无菌室进行换鞋换衣，然后把传送窗的东西捡到推车上。 8、对手、无菌操作台进行酒精消毒，然后点燃酒精灯。把一大包培养皿拿到无菌操作台里面，拆开培养皿，如果培养皿里面有水，可以甩干，表面有水可以在报纸上搽干。把试管倾斜拿进无菌操作台里面，拆开报纸，按编号把试管放入试管架里面。把大烧杯拿进无菌操作台里面。熄灭酒精灯，打开排风机，把里面的热气排干静，然后关闭排风机。 9、打开酒精灯，把MRS培养基拿进无菌操作台里面，拆开报纸，拔开瓶塞丢到大烧杯里面。倒培养基，瓶口一直放在火焰上面，培养皿开口也一定要放在火焰上面，每一个培养基尽可能的均匀，而且平板必须放平，防止平板倾斜，一边厚一边薄，尽可能的做到均匀点，倒完培养基，清理操作台。如果平板过热，可以把平板拿到手推车上面冷却，但是注意大的培养皿一定要盖住小的培养皿，防止空气中的细菌掉落到小培养皿的MRS培养基上面。熄灭酒精灯，打开排风机，把三角瓶拿到手推车上面，等气体变冷，关闭排风机。 9、稀释：点燃酒精灯，把大的枪头的报纸拆开，把样品、225mL的稀释液拿进无菌操作台，拆开报纸，橡皮筋丢进大烧杯里面，报纸先放在里面，拔开瓶塞，用10mL的移液管移取25mL样品于225mL的生理盐水中，然后塞紧瓶塞，把移液管放入大烧杯里面，倾斜着拿出三角瓶，用手摇匀，把漩涡中心摇到瓶底，大概要2~3min左右，然后倾斜的在拿进无菌操作台里面。拔出瓶塞，用1000uL移液枪吸取1mL菌液，再塞上瓶塞，然后把菌液放入10-1的试管中，用摇匀机摇匀试管中的菌液；再拔出10-1试管塞，用1000uL移液枪吸取1mL菌液，再塞上试管塞，把菌液放入10-2的试管中，用摇匀机摇匀试管中的菌液；如此，直到摇匀机把10-6 试管摇匀好。用报纸把无菌操作台面搽干净，然后再西施另一个样品。做完以后，盖灭酒精灯，打开排风机，拿出三角瓶、样品，等气体变冷后关闭排风机。 10、接种：点燃酒精灯，把培养皿按序号依次放好，拆开500uL的枪头（防止散架），用100uL的移液枪，插进枪头转两圈，然后拿出