基因转染β肾上腺素受体激酶抑制剂对哮喘小鼠β受体信号转导调节的分析-呼吸内科专业论文.docxVIP

南京医科大学硕士学位论文基因转染13肾上腺素受体漱酶抑制剂对哮喘 南京医科大学硕士学位论文 基因转染13肾上腺素受体漱酶抑制剂对哮喘 小鼠D受体信号转导调节的研究 摘要 目的 p肾上腺素受体激酶(13ARI(1)磷酸化激活态p受体，是长期应 用p受体激动剂导致p受体下调的最主要的原因之一。我们构建在肺 部表达p ARKl抑制剂(pARKct)的表达质粒，并通过基因转染的方 式来研究13ARKct对哮喘小鼠和长期应用D 2受体激动剂小鼠肺部D 受体信号转导的调节。 方法 1．取正常小鼠的脑组织作为模板，经RT-PCR取得目的基因，构 建以pcDNA3．1为载体的表达质粒。 2．建立哮喘动物模型和长期应用p受体激动剂的哮喘动物模型。 3．质粒DNA经脂质体的包裹，通过尾静脉注射和气管内滴入的 转染途径进行基因转染。 4．Western-blot检测基因的表达。放免法检测小鼠肺部的D受体和 cAMP的水平。 、l结果 1．经不同途径转染构建的表达质粒在肺部都有目的基因的表达， 但表达的量不同。 2．哮喘小鼠，应用p受体激动剂的哮喘小鼠肺部D受体和cAMP 水平都有下降，下降的程度不同。 3．pcDN乒-13 ARKct转染小鼠肺部p受体的数目和cA!VIP水平都 有上调。＼1／ 结论7 1．构建含有目的基因D ARK。抑制剂的质粒在肺部有表达，表达 的量与转染途径和DNA的量相关。 南京医科大学硕士学位论文2．基因转染15 南京医科大学硕士学位论文 2．基因转染15 ARKct基因对哮喘小鼠及长期应用D受体激动剂后 的哮喘小鼠肺部p受体和cA／VII)的下降都有抑制作用，但D ARKct 在两者中的作用机理不同。 关键词 哮喘 基因转染 D受体 cAMP D ARKct G p y D受体激动剂 南京医科大学硕士学位论文Study 南京医科大学硕士学位论文 Study the regulation of fl-adrenergic receptor conduction in asthma lung by a B-adrenergic receptor kinase inhibitor gene transfer Abstract objective Phosphorylation of serine and threonine residues at the carboxy．terminus of the agonist-occupied且receptor catalysed by且 ARKl has been delineated as a molecular mechanisms that result in且 2-adrenoceptor desensitization in asthma lung．Construct a recombination plasmid encoding the carboxyl terminus of 13 ARKI(13 ARKct)which contains the domain responsible for binding to the 13 v-subunits of activated G proteins(G 13 Y)，a process required for the activation of endogenous 13 ARKl，and study the expression and influence ofobjective gene on B receptor signal conduction of asthma lung through gene transfer in vivo． Method： 1．The cDNA encoding murine 13ARKl residues GlP495 to Leu689 amplified using RT-PCR is inserted into a plasmid to construct a recombination expression plasmid pcDNA一13 ARKct． 2．Establish an asthma animal model and an asthma animal treated with D AR agonist． 3．We have delivered lipid-pcDNA-B ARKct complexes in vivo intravenously or intratracheally to the lung of animal． 4．Werstem—blot is used to detect the expression of D ARKct in lun