基础微生物实验板书..pptVIP

实验一 显微镜的构造和使用方法与细菌的革兰氏染色 1．实验目的与要求 （1）了解普通光学显微镜的构造 、学会显微镜使用和维护方法； （2）掌握细菌涂片技术、革兰染色方法及其原理； （3）熟悉细菌基本形态。 2.实验内容 （一）普通光学显微镜的构造? 分光学和机械两大部分。光学部分包括接目镜、接物镜、集光器、光源等；机械部分有镜筒、镜臂、镜座、旋转器、载物台、光圈、倾斜关节、调节螺旋、次台等。 （二）油镜使用的基本原理 油镜头的晶片细小，进入镜中的光亮亦较少，其视野较用高倍镜时暗。当油镜和标本间介质为空气时，因空气与玻璃的折射率不同，会有一部分光线被折射而不能进入油镜内，使视野更暗，若在镜头与标本之间放上与玻璃的折射率相同的油类，如香柏油等，则光线不发生折射，从而增加视野的照明度。 （三）显微镜的使用方法 1.观察前的准备? 2、低倍镜观察? 3、高倍镜观察? 4、油镜观察? 5、用低倍镜和高倍镜观察酵母标本片，油镜观察球菌、杆菌、螺旋菌的染色标本片。 （四）简单染色法与革兰氏染色法 （1）观察细菌的基本步骤：先用低倍镜再用高倍镜 （2）革兰氏染色法操作： 涂片 →干燥 →固定 →草酸铵结晶紫出染（1min）→水洗 →碘液媒染（1min）→水洗 →95%乙醇脱色（30s）→水洗 →沙黄复染（1min）→水洗 →滤纸吸干 →油镜检查 4．注意事项 （1）细菌制片时不宜涂厚。 （2）严格保证脱色和染色时间。 （3）使用显微镜注意保护镜头。 思考题 1、绘出你所观察到的细菌形态图。 2、观察细菌时为何使用油镜？它与普通物镜在使用方法上有何不同？ 3、光学显微镜的目镜与物镜的常用放大倍数？显微镜的放大倍数越高，分辨力越高吗？为什么?举例说明。 1、绘出你所做的革兰氏染色制片中细菌的形态图，并标明总放大倍数及染色反应结果。 2、详叙革兰氏染色的原理及操作方法，染色时应注意哪些问题？ 实验二 培养基的制备 1．实验目的与要求 （1）掌握一般培养制备原理及原则，并学会配制一般普通培养基操作过程； （2）学习微生物实验室常用灭菌设备的使用方法； （3）学习玻璃器皿的包扎方法。 2．实验内容提要 （1）液体培养基的制备 （2）固体培养基的制备 （3）微生物实验室常用灭菌设备的使用方法和灭菌方法 （4）玻璃器皿的包扎方法 （5）棉塞的制作方法 3．实验操作要点 1配料 → 温水溶解 → 校正pH值 → 煮沸 → 加琼脂融化 → 过滤 →分装 →加盖棉塞 →包扎 →灭菌 →无菌检查（液体培养基的制备时不加琼脂） 2微生物实验室常用灭菌设备的使用 （一）?? 手提式高压蒸汽灭菌器? （二）?? 干热灭菌箱 （三）紫外线灭菌室? 4．注意事项 （1）配制培养基要注意操作程序，尤其需先校正pH值，后加琼脂。 （2）湿热灭菌时，高压锅要注意排尽空气；灭菌后压力降至0以下才能打开灭菌锅。 （3）干热灭菌时，105℃关闭气门；灭菌后温度降至60℃以下才能打开舱门。 思考题 1．配制普通营养琼脂培养基300-500ml，操作高压蒸汽灭菌全过程，灭菌后摆斜面和倒平板，制成斜面培养基和平板培养基。 2．包扎平皿、吸管，制作试管和三角瓶棉塞，并进行干热灭菌。 3．培养基制备的原则及种类？如何调节培养基的PH值？调节是应注意哪些问题？ 4．高压蒸汽灭菌之前，为什么要放尽器内冷空气？灭菌后，压力未降至零时为何不能开盖？ 5．高压蒸汽灭菌为什么比干热灭菌所用温度低，却又相同灭菌效果？ 实验三.微生物的分离培养与纯培养 1．实验目的与要求 学习和掌握微生物各种分离方法及其纯粹培养方法。 2．实验内容提要 （1）平板划线分离； （2）可疑菌落的镜检和纯培养。 3．实验内容 （1）平板划线分离； 此法为细菌和酵母菌最常用分离培养法。平板划线凡是甚多，随个人习惯而异，其目的均是使检样作适当的稀释，以求获得独立菌落（既由一个菌繁殖而形成的孤立群落），防止发育成菌苔（既由两个或两个以上菌体繁殖而成的群落），以便于观察菌落性状，浆目的菌分离与纯培养。 （2）可疑菌落的镜检和纯培养。 1.菌落性状的观察及选择 2.平板接种斜面纯培养法 4．注意事项 （1）平板划线分离时，待测样品应适当稀释，使细胞分散容易得到单菌落。 （2）平板划线分离操作时，勿划破培养基表面。 （3）挑取中等大小一半可疑菌落镜检，另一半进行纯培养。 5、作业与思考题 1.采用平板划线分离法和平板接种斜面法，从大肠杆菌和四联球菌（或微球菌）的混合菌液中，分离纯化出大肠杆菌。所用分离培养基为普通营养琼脂。 2.同上述操作，从被杂菌污染的酸奶发酵剂中分离纯化出保加利亚杆菌或嗜热链球菌。所用分离培养基为乳清琼脂培养基。 3.将所分离的目的菌菌落进行革兰氏染色并绘出细胞