基于“疏通肺络法”研究艾灸对肺纤维化大鼠上皮细胞- 间质细胞转分化机制的影响-中西医结合基础专业论文.docxVIP

成都中医药大学 成都中医药大学 2015 届硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 中文摘要 研究目的： 肺纤维化（pulmonary fibrosis,PF)是呼吸系统最严重的疾病之一,临床上主要表 现为进行性呼吸困难、喘息、气短、咳嗽咯痰,以限制性通气功能障碍,低氧血症为 主,最终导致呼吸衰竭。上皮细胞-间质细胞（epithelial-mesenchymal transition,EMT） 理论是近年国际研究器官纤维化的主要成果之一。因此本课题拟在前期研究成果 的基础之上,采用疏通肺络治法,选取（肺俞、膏肓俞）艾灸（moxibustion）,观察由 博来霉素复制的经典肺纤维化大鼠模型在艾灸治疗疗程中上皮细胞蛋白 E-钙黏蛋 白（E-cadherin,E-cad）,间质细胞蛋白α-平滑肌蛋白（α-smooth muscle actin,α -SMA）、波形蛋白（vimentin）的 mRNA 表达的动态改变,初步阐明疏通肺络法调 控肺纤维化 EMT 关键位点与调控规律。 方法： 8 周龄健康 SPF 级大鼠 81 只,体重 180 士 20g,雌雄各半。将大鼠随机分组：空 白对照（C）组 9 只；模型（B）组：模型 7 天（B7）组 9 只、模型 11 天（B11） 组 9 只、模型 23 天（B23）组 9 只、模型 35 天（B35)组 9 只；艾灸（M）组：艾灸 11 天(M11）组 9 只、艾灸 23 天（M23）组 9 只、艾灸 35 天（M35）组 9 只；阳性 对照（泼尼松,P）组 9 只。造模采用 Thrall 等方法气管内一次性注入博来霉素复制 肺纤维化模型,空白对照组同样按造模方法予以气管内一次性注射等体积的生理盐 水。各组造模均于第二天开始治疗及干预,艾灸组交替艾灸双侧肺俞、膏育俞；泼 尼松组以泼尼松灌胃；空白组和所有模型组与艾灸组采取同样的抓取固定,不给予 任何治疗。模型组第 7、11、23、35 天,分别选对应时间点组大鼠；艾灸组第 11、 23、35 天（每疗程后一天）,分别选取对应时间点大鼠；泼尼松组、空白组于 35 天后全部选取。各组称取体重,采取股动脉放血处死大鼠,打开胸腔,观察肺大体颜 色、体积、有无出血点、结节等。取左肺组于 10％中性甲醛固定,再选取左肺上叶 固定、包埋、切片行 HE 、Masson 染色后,按照 Szapie 法进行肺泡炎分级评分和肺 纤维化分级评分。取右肺上叶组织用于进行实时荧光定量聚合酶链反应（QPCR） 检测 E-cadherin mRNA、α-SMA mRNA、vimentin mRNA 的表达。实验过程中所 得数据均采用 SPSS19.0 进行统计学分析,所有计量数据都用均数土标准差來表示, 采用多因素方差分析进行统计学分析,P0.05 表示差异具有统计学意义。 结果： I 1.各组大鼠一般情况观察： 空白对照组大鼠呼吸均匀平稳,毛发润泽光亮,反应灵敏,大便成形,体重正常增 长；模型组大鼠呼吸急促,胸廓起伏增大加快,鼻部及爪甲呈青紫色,精神萎靡不振, 弓背蜷缩,毛发稀疏无光泽,大便糖稀,体重明显下降；治疗后,艾灸组与模型组相比 一般情况有较大的改善；阳性对照组同艾灸组无明显差异。 2.肺系数 模型组、艾灸组和阳性对照组各组肺系数均显著大于空白对照组(P0.01)；模 型组 11d 与艾灸组 11d 无统计学差异（P0.05）,模型组 23d 肺系数较艾灸组 23d、 模型组 35d 肺系数较艾灸组 35d 均升高,有显著性差异（P＜0.01）；模型组 35d 肺 系数较阳性对照组高,有统计学差异（P＜0.05）；艾灸 35d 组与阳性对照组肺系数 无统计学意义（P0.05）。 3.病理学观察 3.1 模型组：模型组第 7、11d 肺泡炎程度较空白对照组均显著升高（P0.01）,模 型组 7d 肺纤维化程度与空白对照组无明显区别,统计学无差异（P0.05）,模型组 11d 肺纤维化明显较空白对照组严重（P0.01）；模型组第 23、35d 肺泡炎程度减 轻但较空白对照组仍严重（P0.05）,模型组 23、35d 肺纤维化程度较空白对照组 严重,有显著性差异（P0.01）。 3.2 艾灸组：艾灸组 11d 肺泡炎程度较空白对照组严重（P0.01）,艾灸组 23、35d 肺泡炎程度有所减轻,较空白对照组仍有差异（P0.05）；艾灸组 11d 较模型组 11d 肺泡炎症有所减轻,有统计学差异（P0.05）,模型组 23 与艾灸组 23d 无明显差异（P ＞0.05）,艾灸 35d 较模型 35d 肺泡炎明显减轻有显著性差异（P0.01）；艾灸组 11、23、35d 肺纤维化程度较空白对照组严重（P0.01）,艾灸组 11、23d 分别与模 型组 11、23d 无