第04站章核酸的结构与功能.ppt

DNA变性的本质是双链间氢键的断裂 四、核酸的理化性质 （二）核酸的变性、复性与杂交 1. 变性（denaturation） 在一定条件下（例如加热）对开双链核酸碱基对氢键，可以使其局部解离，甚至完全解离成单链，形成无规则线团，也称为溶解（melting）。 方法：过量酸，碱，加热，变性试剂如尿素、 酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等 变性后其它理化性质变化： OD260增高 粘度下降 比旋度下降 浮力密度升高 酸碱滴定曲线改变 生物活性丧失 例：变性引起紫外吸收值的改变 DNA的紫外吸收光谱 增色效应（hyperchromic effect） ：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 热变性 解链曲线：如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260（absorbance，A，A260代表溶液在260nm处的吸光率）值作图，所得的曲线称为解链曲线。 Tm：变性是在一个相当窄的温度范围内完成，在这一范围内，紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的温度，成为解链温度，又称融解温度(melting temperature, Tm)、变性温度、熔点。其大小与G+C含量成正比。 六、核酸的理化性质 （二）核酸的变性、复性 2. 复性（renaturation） 两股单链核酸的序列部分互补或完全互补，则在一定条件下可以自发结合，形成双链结构，称为“退火（annealing）”。 复性：同一来源的变性核酸单链部分互补或完全互补，则在一定条件下可以形成双链结构的过程。 核酸复性时260nm的紫外吸收将下降，称为减色效应（hypochromic effect）。 变性与复性示意图 六、核酸的理化性质 （二）核酸的变性、复性 3. 杂交 不同一来源的变性核酸单链部分互补或完全互补，则在一定条件下可以形成双链的过程，称为杂交(heteroduplex)。 核酸分子杂交示意图 * 广东药学院 李春梅 * 广东药学院 李春梅 DNA-DNA 杂交双链分子 变性 复性 不同来源的DNA分子 * 广东药学院 李春梅 * 广东药学院 李春梅 核酸分子杂交的应用 研究DNA分子中某一种基因的位置 鉴定两种核酸分子间的序列相似性 检测某些专一序列在待检样品中存在与否 是基因芯片技术的基础 主要内容 一、核酸的分类、分布与功能 二、核酸的分子组成 三、核酸的分子结构 四、核酸的理化性质 五、核酸的提取与定量(自学) 五、核酸的提取与定量 （一）核酸的提取 主要步骤： ①破碎细胞 ②出去多余的蛋白质、多糖等生物大分子 ③分离核酸（DNA或RNA） ④出去杂质 （二）核酸定量 定磷法 定糖法（二苯胺法、地衣酚法） 紫外吸收法 本章的主要内容 一、核酸的分类、分布与功能 二、核酸的分子组成 三、核苷酸的代谢 四、DNA的结构与功能 五、RNA的结构与功能 六、核酸的理化性质 * * * * * * 广东药学院 李春梅 2. 染色体结构 (2) 染色体的结构 核小体：真核细胞染色体的基本单位，由200 bp DNA和组蛋白构成的念珠状结构。 螺线管（30nm纤维） 超螺线管（300nm纤维） 染色单体：700nm 2. 染色体结构 DNA双螺旋 核小体 超螺线管 染色体 螺线管 3. DNA三级结构的生理意义 DNA分子在长度上高度压缩，有利于装配 超螺旋结构影响DNA复制和转录 4. DNA的功能 DNA是遗传信息的载体，主要以基因的形式携带遗传信息，是生物遗传的物质基础，。 基因（gene）是DNA分子中的功能性片段，是能编码有功能蛋白质或合成RNA所必需的完整序列。 生物体的全部基因序列称为基因组(genome)，包含了所有编码RNA和蛋白质的序列及所有的非编码序列，也就是DNA分子的全序列。 （四）RNA的种类和分子结构 RNA的一般特点 RNA比DNA小很多； RNA的种类、大小和结构表现出多样性；RNA通常以单链的形式存在，但有复杂的局部二级结构或三级结构（右手螺旋结构、茎环结构）。 RNA结构示意图 发夹结构（Hairpin）/茎-环结构（stem-loop） （四）RNA的种类和分子结构 RNA的种类及功能 细胞核/细胞质 线粒体 功能 核蛋白体RNA rRNA mt rRNA 核蛋白体组成成分 信使RNA mRNA mt mRNA 蛋白质合成的模板 转移RNA tRNA mt tRNA 转运氨基酸 不均一核RNA hnRNA 成熟m