第31章二核酸的酶促降解和核苷酸代谢.ppt

第三一章 核酸的酶促降解和核苷酸代谢 第一节 核酸的酶促降解 核 酸 酶 外切核酸酶对核酸的水解位点 内切核酸酶对RNA的水解位点示意图 核糖核酸酶类 （1）牛胰核糖核酸酶（RNase I） 只作用于RNA，作用点为嘧啶核苷－3‘－磷酸与其它核苷酸之间的连键。 产物3‘－嘧啶核苷酸或以3‘－嘧啶核苷酸结尾的寡核苷酸。 （2）核糖核酸酶酶T1 　专一性比RNase I更高。作用点： 3‘－鸟苷酸与其相邻核苷酸的5‘－OH之间的连键。 产物以3‘－鸟苷酸为末端的寡核苷酸或3‘－鸟苷酸。 （3）核糖核酸酶T2 作用点：Ap残基，可以将tRNA完全降解成3‘－腺苷酸结尾的寡核苷酸。 脱氧核糖核酸酶类 （1）牛胰脱氧核糖核酸酶（DNase I） 切断双链或单链DNA成为5 ‘－磷酸为末端的寡核苷酸，需要镁离子激活，最适pH7-8，0.01mol/L柠檬酸盐可完全抑制被镁离子激活的活性。 （2）牛脾脱氧核糖核酸酶（DNase II） 降解DNA成为3‘－磷酸末端的寡核苷酸，最适pH4-5， 需要0.3mol/L钠离子激活，镁离子可以抑制此酶。 （3）链球菌脱氧核糖核酸酶 内切酶，作用于DNA，产物为5‘－磷酸为末端的碎片，最适pH7，需要镁离子。 限制性内切酶 常用的DNA限制性内切酶的专一性 限制性内切酶类型 限制性内切酶的命名和意义 第二节 核苷酸的降解 嘌呤的分解 嘧啶的分解 第三节 核苷酸的合成代谢 核糖核苷酸的生物合成 嘌呤环上各原子的来源 IMP的 生物合成 IMP转变为GMP和AMP 嘌呤核苷酸合成补救途径（自学） 嘧啶核苷酸从头合成途径 嘧啶环上各原子的来源 尿嘧啶核苷酸合成途径 嘧啶核苷酸补救合成途径（自学） 脱氧核苷酸的合成 核糖核苷酸的还原反应 核糖核苷酸的还原反应 核糖核苷酸还原酶示意图 脱氧胸腺嘧啶核苷酸的合成 核苷酸的合成及相互关系 本章重点讨论核酸酶的类别和特点，对核苷酸的生物合成和分解代谢作一般介绍。 第一节 核酸的酶促降解 第三节 核苷酸的合成代谢 第二节 核苷酸的分解代谢 一、核酸酶 二、限制性内切酶 核酸酶 核苷酸酶 核苷磷酸化酶 核酸 核苷酸 核苷 碱基+戊糖-1-P 磷酸 1、核酸酶的分类 （1）根据对底物的 专一性分为 （2）根据切割位点分为 核糖核酸酶(RNase) 脱氧核糖核酸酶(DNase) 非特异性核酸酶 核酸内切酶 核酸外切酶 2、核酸酶的作用特点 5′ p p p p OH B p p p p 3′ B B B B B B B 牛脾磷酸二酯酶（ 5′端外切5得3） 蛇毒磷酸二酯酶（ 3′端外切3得5） 5′ p p p p OH Py Pu Py Py 1′ p p p G A C U p p p G A 3′ RNAase I 牛胰核糖核酸酶 RNAase I RNAase T1 核糖核酸酶 RNAase T1 Pu ：嘌呤 Py：嘧啶 ? 类型 ? 命名 ? 意义 原核生物中存在着一类能识别外源DNA双螺旋中4-8个碱基对所组成的特异的具有二重旋转对称性的回文序列，并在此序列的某位点水解DNA双螺旋链，产生粘性末端或平末端，这类酶称为限制性内切酶（ristriction endonuclease）。 酶 辨认的序列和切口 说明 ‥ ‥A G C T ‥‥ ‥ ‥T C G A ‥ ‥ ‥ ‥G G A T C C ‥‥ ‥ ‥C C T A G G ‥‥ ‥ ‥A G A T C T ‥‥ ‥ ‥T C T A G A ‥‥ ‥ ‥G A A T T C ‥‥ ‥ ‥C T T A A G ‥‥ ‥ ‥A A G C T T‥‥ ‥ ‥T T C G A A ‥‥ ‥ ‥G T C G A C ‥‥ ‥ ‥C A G C T G ‥‥ ‥ ‥C C C G G G ‥‥ ‥ ‥G G G C C C ‥‥ Bam H I Alu I Bgl I Eco R I Hind Ⅲ Sal I Sma I 四核苷酸，平端切口 六核苷酸，平端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 I型：分子量大于105，多亚基，需S-线苷蛋氨酸、ATP和Mg2+ ，识别位点与切割位点相差甚远，产物为异质，是限制与修饰相排斥的多功能酶. Ⅱ型：分子量小于105，需M