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核酸和蛋白质的生物合成 复旦大学药学院 丁廷波 遗传信息传递的规律—中心法则 DNA的生物合成 — 半保留复制 半保留复制的概念 DNA的复制是将两条亲本链分开，每一条作为合成新链的模板，按碱基配对的规则合成新链，形成两个子代DNA双螺旋结构。 子代DNA的双链中一条是原来的链，另一条是新合成的链，称为半保留复制（Semi-conservative replication）。 DNA复制过程(以原核细胞为例) 1.复制的起始 1）复制起始点 2）DnaA蛋白的结合 3）Dna B（解链酶，helicase）的作用 4）单链结合蛋白（SSB）的作用 5）Dna G（引物酶,primase）的作用 6）拓扑异构酶(topoisomerase)的作用 拓扑异构酶有两种。可以切断超螺旋的一条链或者两条链，使超螺旋放松。 2.复制的延伸 DNA聚合酶（DNA polymerase) DNA聚合酶III接在RNA引物后开始合成新DNA链； DNA聚合酶III以二聚体形式存在，分别负责先导链和后滞链上DNA新链的合成； 合成过程中，拓扑异构酶和解旋酶(Dna B)负责解开双链，引物酶负责合成岗崎片段上的引物； 3.复制的终止 E.coli DNA上存在复制终点，Tus(terminus utilization substance)蛋白可以和复制终点结合，阻止复制叉的前进，使复制停止； 新形成的两个子代DNA分子由拓扑异构酶I或II帮助完成分离，形成两个独立的子代DNA分子。 真核生物DNA复制的特点 1.DNA的合成发生在细胞周期的S期。 2.DNA聚合酶有α，β，γ，δ，ε五种。 3.DNA聚合酶α和δ形成复制聚合体， 聚合酶δ合成主导链，聚合酶α合成随从链。 4.聚合酶γ负责线粒体DNA的合成，而ε 和β参与DNA修复。 5.线性DNA的端粒由端粒酶负责复制。 6.多个复制起始点，双向复制。 真核细胞的周期 Gap 1 Synthesis Gap 2 Mitosis DNA的修复 光复活修复（直接修复方式之一） 紫外线下胸腺嘧啶形成二聚体;光复活酶在蓝光照射下活化，解开 二聚体胸腺嘧啶 切除修复 无碱基部位的修复 甲基化指导的不配对修复 RNA的生物合成 — 转录及转录后加工 转录的过程—起始阶段 转录起始阶段RNA聚合酶的作用 转录模板的特点： 1）DNA的一条链为模板 2）不对称转录 原核生物启动子 真核生物的启动子 原核生物的终止子结构 原核生物的RNA聚合酶 真核生物的RNA聚合酶 ρ因子 ρ因子是原核生物中与转录终止有关的蛋白质，具有两种酶活性：解旋酶、ATP酶。 原核生物转录后加工 原核生物的转录和翻译是偶联的，mRNA很少被加工。 原核生物的tRNA和rRNA需要加工。 真核生物转录后加工 1. 5’-端戴帽 2. 3’-端加尾 3.切除内含子，拼接外显子—剪接 4.部分序列的甲基化。 5’-端戴帽 3’-端加尾 RNA剪接示意图 部分序列的甲基化 RNA的另一种合成方式—复制 RNA指导的RNA聚合酶 正链RNA 负链RNA 基因转录的调节 原核细胞转录水平的调节—操纵子学说 操纵子的结构 乳糖操纵子的工作原理 真核细胞基因转录的调节 相关概念： 1.顺式作用元件（顺式调控元件） (Cis-acting element) 2.反式作用因子 (Trans-acting factor) 顺式作用元件（顺式调控元件）(Cis-acting element) 与被调控基因存在于同一个DNA上，能够调节该基因转录的特定序列， 称为顺式作用元件。包括启动子和增强子。 反式作用因子(trans-acting factor) 能直接或间接辨认、结合顺式作用元件的蛋白质，在真核生物有很多种类，统称为反式作用因子。 因子和因子之间又需要互相 辨认、结合，以准确的控制基因是否转录、何时转录。 反式作用因子家族之 — 亮氨酸拉链 反式作用因子家族之 — 锌指结构 DNA的合成方式之— 逆转录 逆转录的过程 1.RNA指导的DNA合成 逆转录酶 2.RNA的水解 RNase H 3.DNA指导的DNA合成 DNA聚合酶 蛋白质的生物合成之— 翻译 mRNA作为翻译的模版 密码子：在mRNA的特定区域(翻译编码区），每三个相邻的碱基组成一个密码子。 同一段mRNA，不同的阅读框架 tRNA转运翻译的原料—氨基酸 tRNA和氨基酸的连接—酯键 密码子与反密码子的摆动配对 rRNA参与构建翻译的工厂—核糖体 翻译过程之—氨基酸的活化 AA + tRNA → 氨基酰-tRNA 细胞中一般只有二十种氨基酰-tRNA合成酶，不同tRNA与同一氨基酸的结合均由同一个酶催化。合成酶有很强的校对功能。 起始氨基酰-tRNA 原核生物的起始氨