厚壳贻贝新型抗菌肽的分子特征和重组表达-海洋生物学专业论文.docxVIP

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厚壳贻贝新型抗菌肽的分子特征和重组表达-海洋生物学专业论文

浙江海洋学院 浙江海洋学院 论文原创性声明 本人声明,所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的 研究成果。文中依法引用他人的成果,均已做出明确标注或得到许 可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果, 也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。 本人如违反上述声明,愿意承担以下责任和后果: 1 交回学校授予的学位证书; 2 学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报; 3 本人按照学校规定的方式,对因不当取得学位给学校造成的 名誉损害,进行公开道歉; 4 本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。 论文作者签名: 日期: 年 月 日 论文知识产权权属声明 本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品,知识产权 归属浙江海洋学院。学校享有以任何方式发表、复制、公开阅览、 借阅以及申请专利等权利。本人离校后发表或使用学位论文或与该 论文直接相关的学术论文或成果时,署名单位仍然为浙江海洋学院。 学位论文作者签名: 指导教师签名: 日期: 年 月 日 日期: 年 月 日 《中国博士学位论文全文数据库》和 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》投稿声明 研究生处: 本人同意《中国博士学位论文全文数据库》和《中国优秀硕士 学位论文全文数据库》出版章程的内容,愿意将本人的学位论文委 托研究生处向中国学术期刊(光盘版)电子杂志社的《中国博士学位 论文全文数据库》和《中国优秀硕士学位论文全文数据库》投稿, 希望《中国博士学位论文全文数据库》和《中国优秀硕士学位论文 全文数据库》给予出版,并同意在《中国优秀博硕士学位论文全文 数据库》和《中国优秀硕士学位论文全文数据库》以及 CNKI 系列数 据库中使用,同意按章程规定享受相关权益。 论文级别: □硕士 □博士 学位论文作者签名: 指导教师签名: 日期: 年 月 日 日期: 年 月 日 作者联系地址(邮编): 作者联系电话: I I 摘 要 摘 要 长久以来,国际社会对抗菌肽的研究主要集中在高等动物和一些低等昆虫方面, 海洋抗菌肽研究是近年来兴起的一个热点。作者从浙江省重要经济养殖贝类厚壳贻贝 的血清中分离得到两种抗菌活性成分,分别命名为 Myticusin-1 和 Mytichitin。通过 Edman 降解,获得了二者成熟肽 N 端部分序列。为了进一步了解二者的基因组成,通 过在 NCBI 提供的数据库中搜索同源核酸序列并以之为模板设计引物,成功克隆得到 二者的成熟肽编码序列。“两步法”是作者结合逆转录反应自身及逆转录酶固有的特 点,并参阅相关文献案例设计的一套用于克隆 cDNA 3’端非翻译区(UTR)序列的方案, 在本实验中获得了成功。本研究室先前成功构建了厚壳贻贝血细胞 cDNA 文库, Myticusin-1 5’端非翻译区是从文库中克隆到的,但并没有得到 Mytichitin 的 5’端非翻 译区。经过测序确认目前已经获得了 Myticusin-1 cDNA 全序列,其 ORF 编码生成 Myticusin-1 前体肽,全长 128aa,前体肽由 24 个氨基酸长度的信号肽外加 104 个氨基 酸长度的成熟肽组成。编码 Mytichitin 成熟肽共 56aa,包括 6 个半胱氨酸。 运用实时荧光定量 PCR 进一步研究了二者的组织特异性分布以及细菌诱导后基 因丰度变化情况。结果表明,前者主要表达场所为血细胞,并在诱导后 36h 含量达到 峰值;后者主要表达场所为性腺,诱导 12h 后含量达到峰值。 通过基因工程的手段,成功将二者活性肽基因导入 pET-28a(+)原核表达载体中。 Mytichitin 的重组表达获得了成功,分子条带大小符合预期,Myticusin-1 的重组表达 则有待后续发酵条件优化。 上述研究为这两种新型抗菌肽研发成为新型药物分子并最终实现工业化生产奠 定了基础。 关键词:厚壳贻贝;抗菌肽;荧光定量 PCR;pET-28a(+);重组表达 II II ABSTRACT ABSTRACT Higher animals and insects are always preferred when it comes to the study of antimicrobial peptides, while recently researchers shift their focus to marine animals. We obtained two kinds of antibacterial constituents by isolating the hemolymph sample of Mytilus coruscus, one of the most commercially important bivalves in Zhejiang

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