鲮生长激素的重组表达及其多克隆抗体的制备.PDFVIP

第4卷第 1期 南 方 水 产 Vo1．4．No．1 2008年 2月 SouthChinaFisheriesScience Feb．，2008 鲮生长激素的重组表达及其多克隆抗体的制备 姜巨峰 ，张殿 昌 ，苏天凤 ，熊小飞 ，江世贵 (1．中国水产科学研究院南海水产研究所，广东 广州 510300；2．上海水产大学生命科学与技术学院，上海 200090) 摘要：IPTG诱导含有鲮 (Cirrhinusmolitorella)生长激素基因 (growthhormone，GH)的工程菌 M15 (pQE30一 GH)重组表达鲮生长激素蛋白。SDS—PAGE凝胶电泳结果表明，在24．5kDa处有 1条重组表达鲮生长激素条带， 经分离纯化、复性和浓缩后得到有活性的重组鲮生长激素蛋 白。以复性浓缩后的重组鲮生长激素蛋 白为抗原， 采用改进的方法对新西兰大白兔进行皮下多点免疫注射 ，获得兔抗鲮生长激素多克隆抗体。经ELISA检测该免 疫血清的滴度为 12800。以该多抗为一抗，Westernblotting可以检测到 10ng的抗原量；并且在鲮垂体组织提取 液中和血清中检测到一种能与该血清作用的大小约为21．5kDa的蛋白条带。说明该试验所制备的兔抗鲮生长激 素多克隆抗体具有较好的免疫活性。 关键词：鲮 ；生长激素；重组表达；多克隆抗体 中图分类号：Q784 文献标识码：A 文章编号：1673—2227一 (2008)01—0036—05 Recombinantexpression andantibodypreparation ofmud carp growth hormone JIANGJufeng ，ZHANGDianchang ，SU Tianfeng ，XIONGXiaofei，JIANG Shigui (1．SouthChinaSeaFisheriesResearchInstitute，ChineseAcademy FisherySciences，Guangzhou510300，China； 2．CollegeofAqua—lifeScienceandTechnology，ShanghaiFisheryUniversity，Shanghai200090，China) Abstratct：AfterinducementofIPTG，therecombinantproteinofmudcarpgrowthhormone(mcGH)wasexpressedinEscherichiaCO— li．SDS—PAGEelectrophoresisshowedthattherewasabandofabout24．5kDa，whichsizewassimilartothepredictedmcGH．After purificationandrenaturation，therecombiantmcGH wasusedasanantigentoinoculatetherabbit．Thetiteroftheobtainedantiserum wasdeterm inedtobe1：12800byindirectenzyme—linkedimmunosorbentassay(EIdSA)．Immunochemistryanalysisshowedthatthe antiserum coulddetecttheantigenaslowas10ng．Furtherm ore，westernblottinganalysisshowedthat21．5kDaproteininmudcarp pituitaryandserum couldbedetectedusingtheprimary antibody．Theseresultsshowedthatthepolyclonalantiserum ofrabbitanti— mcGH waseffectiveandhighlyspecific． Keywords：mu