生物工程下游技术-绪论.pptVIP

包涵体（inclusion bodies, IB) 在E.coli中表达的重组蛋白质, 往往形成不溶解的无活性重组蛋白质的细胞内聚集物即包涵体。 包涵体蛋白质的溶解、复性和纯化过程需要变性剂(如尿素、盐酸胍、SDS等) 的帮助。 由于包涵体蛋白质分子中C ys 的侧链巯基常为还原态, 有时会形成错配的S一S键, 因此溶解包涵体时加入还原剂( 如DTT、巯基乙醇等) , 可使目标蛋白质错配的S一S键打开。 经变性剂和还原剂处理的处于变性状态的蛋白质, 需经过再氧化和再折叠( refolding) 过程使其复性。 复性(refolding)方法 稀释法(dilution) 透析法(dialysis) 超滤法(ultrafiltration) 宁云山，李妍，王小宁. 包含体蛋白质的复性研究进展,《生物技术通讯》，2001，12（3），237-240 李妍，宁云山，郝文波，李莉，李明. 恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶融合蛋白复性及纯化的研究. 第一军医大学学报，2003，23（12）：1273-1276. 生物产品萃取技术(extraction) 今化学工业普遍采用的分离方法，具有传质速率快、生产周期短、便于连续操作、容易实现自动控制、分离效率高、生产能力大等一系列优点。 分类： 双水相萃取(aqueous two-phase extraction, ATPE) 反胶团萃取：(reversed micellar extraction) 亲和萃取 (affinity extraction ) 超临界萃取（supercritical fluid extraction，SFE） 色谱分离技术（chromatography） 凝胶过滤(gel filtration) 疏水层析(hydrophobic chromatorgraphy) 离子交换层析(ion-exchange chromatoprapy) 亲和层析(affinity chromatopraphy) 下游加工过程的一般流程 （沉淀、吸附、萃取、超滤、结晶） 发酵液 初步纯化 细胞碎片分离 细胞破碎 细胞分离 高度纯化 成品加工 预处理 胞外产物 （加热、调pH、絮凝） （过滤、离心分离、膜分离) （匀浆、研磨、酶解） （离心分离、双水相萃取、膜分离） （重结晶、离子交换、色谱分离、膜分离） （浓缩、无菌过滤、干燥、成型） 胞外产物 提取 精制 ——产品的收得率和质量控制。 工业生产规模要求 高纯度 大规模 经济性 生物相容性 在疾病治疗方面的应用 生物制药 抗生素 基因治疗 思考题 什么是生物工业下游技术？一般工艺过程及其特点？ 各生物分离工程主要技术的原理、适用范围、主要步骤、注意事项和应用实例。 * * 组成：下游加工过程是生物技术的重要组成部分，发酵液或反应液需要经过下游加工过程才能成为成品； ②费用：传统发酵工业中下游部分的费用占整个工厂投资费用的６０％，而对重组ＤＮＡ生产蛋白质等基因工程产品，下游加工的费用可占整个生产费用的８０％－９０％； ③关注程度：英国政府工业部于１９８３年发起生物分离计划（ＢＩＯＳＥＰ），专门研究下游加工过程；１９８７年英国化学工业会召开了专门讨论下游加工过程的国际会议；我国也于１９８９年在济南召开了一次专门会议；近十年来国内外有关生物分离或蛋白质纯化的专著陆续出版。 * 1988年，日本由40多家公司组建高度分离系统技术研究联合体，瑞典的Pharmacia，Alfa-Laval等组建了Biolink公司，加强在生物工业下游技术领域的研究开发力量，不断推出新技术、新产品、新装备，以抢占更多的市场。 * 移动界面电泳 是将被分离的离子（如阴离子）电泳图谱 混合物置于电泳槽的一端（如负极），在电泳开始前，样品与载体电解质有清晰的界面。电泳开始后，带电粒子向另一极（正极）移动，泳动速度最快的离子走在最前面，其他离子依电极速度快慢顺序排列，形成不同的区带。只有第一个区带的界面是清晰的，达到完全分离，其中含有电泳速度最快的离子，其他大部分区带重叠。 区带电泳 是在一定的支持物上，于均一的载体电解质中，将样品加在中部位置，在电场作用下，样品中带正或负电荷的离子分别向负或正极以不同速度移动，分离成一个个彼此隔开的区带。区带电泳按支持物的物理性状不同，又可分为纸和其他纤维膜电泳、粉末电泳、凝胶电泳与丝线电泳。 等电聚焦电泳 是将两性电解质加入盛有pH梯度缓冲液的电泳槽中，当其处在低于其本身等电点的环境中则带正电荷，向负极移动；若其处在高于其本身等电点的环境中，则带负电向