生物制药工艺学第6章吸附分离法08-3李-20.ppt

第六章 吸附分离法 吸附法(adsorption method)指利用吸附作用，将样品中的生物活性物质或杂质吸附于适当的吸附剂上，利用吸附剂对活性物质和杂质间吸附能力的差异，使目的物和其它物质分离，达到浓缩和提纯目的的方法。 优点： (1)设备简单、操作简便、价廉、安全。 (2)少用或不用有机溶剂，吸附过程中pH变化小，较少引起生物活性物质的变性失活。 缺点： (1) 选择性差，收率不高。 (2)一些无机吸附剂性能不稳定。 第一节 吸附法基本概念 一、吸附： 物质从流体相（气体或液体）浓缩到固体表面从而达到分离的过程称为吸附作用(adsorption)，在表面上能发生吸附作用的固体微粒称为吸附剂（adsorbent），而被吸附的物质称为吸附物（adsorbate）。 二、吸附类型 三、影响吸附的因素 （一）吸附剂 吸附容量：比表面积、种类、活化状况 吸附速度：颗粒度、孔径 机械强度 （二）吸附物 能使表面张力降低的物质，易为吸附 溶解度：较小易吸附 极性吸附剂易吸附极性吸附物 同系物吸附量变化有规律 氢键 吸附剂及被吸附物极性对吸附的影响 极性吸附剂易吸附极性物质，非极性吸附剂易吸附非极性物质； 极性吸附剂适宜从非极性溶剂中吸附极性物质； 非极性吸附剂适宜从极性溶剂中吸附非极性物质。 （三）环境的影响 1、溶剂：单溶剂易吸附，混合溶剂易解吸 2、pH值：PI 3、温度 4、盐的浓度：可能阻止、可能促进 （四）吸附物浓度和吸附剂用量 对蛋白质或酶进行分离时要求浓度1%以下。 吸附剂用量。 第二节 几种常用的吸附剂 无机：白陶土、氧化铝、硅胶、硅藻土 有机：活性炭、纤维素、大孔吸附树脂等 一、活性炭(activated carbon ) 粉末状，颗粒状，锦纶活性炭 是吸附能力很强的非极性吸附剂 溶剂中吸附力： 水乙醇甲醇酯丙酮氯仿 去色素、热原，用量0.02~1% 加热活化 pH影响 辅酶A制备 活性炭提取放线酮 二、人造沸石(zeolite ) 无机阳离子交换剂 Na2 Al2O4·xSiO2·yH2O Na2Al2O4=2Na++Al2O42- 三、磷酸钙凝胶 磷酸钙 磷酸氢钙 羟基磷灰石 主要是其中的钙与蛋白质的负电基团结合 胰岛素纯化 四、白陶土(Kaolin ) 可作为助滤剂与去除热原的吸附剂 五、氢氧化铝凝胶 将氨水或碱液加入铝盐形成的无定形凝胶； 吸附能力和陈化程度有关。 六、氧化铝(Aluminum oxide) 常用的吸附剂 1、碱性氧化铝： 2、中性氧化铝： 3、酸性氧化铝： 氧化铝吸附层析纯化维生素B12 影响因素： (1) Al2O3的颗粒度要均匀，流速控制要很慢； (2) 温度宜在20℃以下层析，洗脱在室温中进行； (3)??? 利用B12在丙酮中不溶的特性，在冰冻条件下结晶3天，结晶析出。 七、硅胶(Silica gel) SiO2·nH2O 硅胶表面的硅羟基能吸附多量的水，称自由水，活性随自由水含量增加而下降。 能吸附非极性化合物和极性化合物 CoQ10制备 洗脱剂的选择 极性溶质：极性大的溶剂洗脱能力就大； 非极性溶质：极性小的溶剂洗脱能力就大。 常用洗脱剂排序（极性增大）： 石油醚甲苯 乙醚氯仿 乙酸乙酯 丙酮 乙醇甲醇 水 乙酸 氧化铝或硅胶为吸附剂 洗脱剂从极性低的开始逐渐增加极性。 次序：石油醚、甲苯、氯仿、乙酸乙酯、 丙酮、乙醇、甲醇、水 、乙酸。 活性炭为吸附剂 洗脱剂从极性高的开始逐渐降低极性。 次序：水、乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿。 第三节 大孔网状聚合物吸附剂 特点 一、大孔网状聚合物吸附剂的类型和结构 Amberlite大网格吸附剂的物理性质 Diaion大网格吸附剂的物理性质 比表面积： 空隙度：系指吸附剂中空隙所占的体积百分率。 孔容度：指每1g吸附剂所含的空隙体积。 骨架密度：系指吸附剂骨架的密度，即每1ml骨架(不包括空隙)的重量(g) 。 湿真密度： 偶极矩：表征极性的强弱，越大，极性越强。 二、大孔网状聚合物吸附剂吸附机理 “类似物容易吸附类似物”的原则： 一般非极性吸附剂适宜于从极性溶剂(水)中吸附非极性物质。 一般极性吸附剂适宜于从非极性溶剂(有机溶剂)中吸附极性物质。 而中等极性的吸附剂则对上述两种情况都具有吸附能力。 三、大孔网状吸附剂的应用特点 吸附： 选择合适的孔径：孔径等于溶质分子直径之6倍比较合适。 水溶液中，一般分子量越大，极性越弱，吸附量就越大。 无机盐会使吸附量增大 溶液的pH 解吸 常用低级醇、酮或其水溶液解吸. 解吸溶剂能使大孔网状