第3章四核酸的化学.ppt

第三章 核酸的化学 一、元素组成 （二）核酸的基本成分 （三）核苷酸的组成 三、核苷酸的衍生物 一、核酸的一级结构 主键为3ˊ, 5ˊ-磷酸二酯键 主链为重复的结构单元（磷酸—戊糖） 侧链为特征结构—碱基 具有严格的方向性：5ˊ→3ˊ 二、DNA分子的空间结构 研究背景 Chargaff规则：A＝T G＝C。 Franklin和Wilkins用X-射线衍射技术分析DNA结晶，取得了DNA分子为螺旋结构的直接证据。 1953年， Watson和Crick在前人研究成果的基础上，建立了DNA分子二级结构的双螺旋结构模型。 （一）DNA分子的二级结构 DNA分子由两条反向平行的多核苷酸链以右手螺旋方式围绕一假想的中心轴形成双螺旋结构。碱基位于螺旋内部，碱基平面与中心轴垂直；脱氧核糖和磷酸基团形成螺旋的骨架，位于螺旋的外侧。 两条链上位于同一平面的碱基按照互补规律缔合形成碱基对，G与C配对形成三个氢键，A与T配对形成两个氢键。 螺旋的每一周包含10个碱基对，相邻碱基对的距离为0.34nm，螺距为3.4nm。螺旋直径为2nm。 双螺旋结构的维系力包括：①氢键：维系双螺旋结构横向稳定； ②碱基堆积力：碱基之间层层紧密堆积，形成疏水型核心，保持双螺旋结构纵向稳定。③离子键：磷酸残基阴离子与介质中的阳离子形成离子键，可降低双链间的静电排斥力。 （二）DNA分子的高级结构 三、RNA分子的结构与功能 （二）tRNA tRNA的主要功能是携带蛋白质合成所需的氨基酸，并按mRNA上的密码顺序“对号入座”地将其定位于多肽链上。 基本结构具有下列共同特点： ①是三种RNA分子中最小的一类，由70～90个核苷酸组成一条单链； ②是含稀有碱基最多的核酸，一般每分子含有7～15个。如二氢尿嘧啶（DHU）、胸腺嘧啶（T）、假尿嘧啶（ψ）、次黄嘌呤（I）等； ③其5ˊ端大多为pG ，3ˊ端全都是CCA-OH； ④碱基组成具有保守性，所有tRNA分子中约有30%的碱基固定不变。 氨基酸臂与反密码环分别位于“倒L”型分子的两端，DHU环与TψC环位于拐角上。 主要依靠碱基堆积力和氢键维系，紧凑而稳定。 （三）rRNA rRNA的功能： 与多种核糖体蛋白组成核糖（ribosome），提供蛋白质生物合成的场所。 核糖体由大小不同的两个亚基所组成。rRNA是构成核糖体大、小亚基的骨架，决定着整个复合体的结构以及蛋白质组分所附着的位置 。 一、核酸的分子大小、粘度、溶解性、酸碱性质 二、核酸的紫外吸收 嘌呤碱和嘧啶碱分子中具有共轭双键，因此核酸具有紫外吸收的特征，最大吸收峰波长为260nm。 利用此特性，可采用紫外分光光度法进行核酸的定性定量分析，也可借此鉴别核酸检品中的蛋白质杂质。 在一定理化因素作用下，DNA双螺旋结构中碱基之间的氢键断裂，变成单链的现象称为DNA变性 在适当的条件下，两条互补单链重新结合并恢复天然的双螺旋结构，称为复性（renaturation） 热变性的DNA缓慢冷却后复性称为退火。 增色效应：当核酸变性或降解时260nm处光吸收值显著增加的现象。 减色效应：核酸复性后，260nm处光吸收值又恢复到原有水平的现象。 加热变性时DNA溶液A260升高达到最大值一半时即DNA解链50%时的温度称为该DNA的熔点或熔解温度（melting temperature Tm）。G＋C比例高，Tm值高。 四、分子杂交与探针技术 分子杂交（hybridization）指不同源的单链核酸分子结合形成杂化的双链核酸的过程。 杂交可发生在DNA-DNA、 RNA-RNA和DNA-RNA之间。 探针（probe）：一段带有放射标记或其他化学标记的寡核苷酸链 制备核酸类药物的途径 ①从生物材料中提取； ②微生物发酵； ③化学合成。 一、核酸的提取 ①破碎细胞； ②提取核蛋白； ③用蛋白质变性剂如苯酚或去垢剂十二烷基硫酸钠（SDS）等，或用蛋白酶处理除去蛋白质； ④用乙醇等沉淀剂使核酸从溶液中析出。 二、核酸的分离纯化 三、核酸含量的测定 四、核酸类药物制备实例 真核生物染色体DNA组装不同层次的结构 DNA （2nm） 核小体链（ 11nm，每个核小体200bp） 纤丝（ 30nm，每圈6个核小体） 突环（ 150nm，每个突环大约75000bp） 玫瑰花结（ 300nm ，6个突环） 螺旋圈（ 700nm，每圈30个玫瑰花） 染色体（ 1400nm， 每个染色体含10个玫瑰花200bp） ① 单链结构，碱基组成为A、G、C、U等，稀有碱基或修饰碱基较多，稳定性较差，易水解。 ② 单链自身回折，碱基互补