万古霉素耐药肠球菌的分子特征及肠球菌感染小鼠代谢组学分析条-微生物与生化药学专业毕业论文.docx

北京协和医学院硕士学位论文 北京协和医学院硕士学位论文 摘要 析中，成功建立了肠球菌感染小鼠脓毒症模型，采用基于LC．MS技术的非靶向代 谢组学分析，对空白对照组与感染后4 h、8 h、24 h组小鼠进行两两比对分析， 在ESI正离子检测模式下分别得到了69种、 69种、 61种差异性代谢物，在 负离子检测模式下分别得到了99种、91种、 90种差异性代谢物，综合两两比 对结果，最终得到了95种差异性代谢物，其中21种差异性代谢物在整个感染过 程中均有显著的变化。代谢物富集分析和代谢通路分析结果推测脓毒症影响氨基酸 代谢、磷脂代谢、三羧酸循环、亚油酸和亚麻酸代谢、尿素循环。以40种差异性 代谢物为对象，建立靶向代谢组学分析方法，针对粪肠球菌ATCC 29212和 ATCC 51299感染小鼠脓毒症模型进行分析，最终在粪肠球菌ATCC 29212感染小 鼠脓毒症模型中筛选出17种潜在生物标志物，在粪肠球菌ATCC 51299感染小鼠 脓毒症模型中筛选出12种潜在生物标志物。 结论我国万古霉素耐药菌在粪肠球菌中分离率较低，但屎肠球菌中万古霉素耐药 情况较严重，并且耐药菌株携带易于传播和转移的vanA基因。同源性分析结果显 示万古霉素耐药存在同源性传播的可能性；在粪肠球菌ATCC 29212感染小鼠脓毒 症模型中发现的17种潜在生物标志物中，感染动物体内牛磺酸、胸苷、胞苷、肌 酸、谷氨酰胺、2．甲基苹果酸、核黄素、柠檬酸8种代谢物含量上升，而 PE(P．16：0／0：0)、肌苷、可的松、马尿酸、吲哚、色氨酸、龙胆酸、蛋氨酸、丙酮酸 9种代谢物含量下降；在粪肠球菌ATCC 51299感染小鼠脓毒症模型中发现的12 种潜在生物标志物中，PE(P．16：0／0：0)、色氨酸、丙酮酸、吲哚、可的松、龙胆酸、 瓜氨酸、马尿酸、桂皮酸9种代谢物含量下降，胞苷、胸苷、组氨酸3种代谢物 含量上升。两株菌感染小鼠脓毒症模型中9个潜在生物标志物相同，具有相似的 结果。通过生物标志物之间的相关性和代谢途径考察，分析推断肠球菌感染小鼠脓 毒症模型影响氨基酸代谢、磷脂代谢及能量代谢过程。 关键词肠球菌；万古霉素耐药；基因型；脓毒症；非靶向代谢组学；靶向代谢组 学；LC．MS／MS；生物标志物 万方数据 北京协和医学院硕士学位论文 北京协和医学院硕士学位论文 ABSTRACT ABSTRACT objective To vancomycin non-susceptible enterococci from 325 strains of clinical enterococci isolated from 2006 to 20 1 2，and tO further conduct the resistance phenotype，resistance genotype and homology analysis of the vancomycin non-susceptible Enterococci；To establish the mouse sepsis model infected by E．faecal ATCC 29212 and E．faecalATCC 51299；To investigate large scale of sepsis subjects with LC—MS based untargeted and targeted analysis methods tO fend reliable potential biomarkers for diagnosis and pathways related to sepsis． Methods Screening of the vancomycin non—susceptible enterococci and detection of the susceptibility to teicoplanin were conducted by blood agar dilution method broth microdilution method．Resistance genotypes were determined by PCR method． Homology analysis was carried out by ERIC—PCR，PFGE and MLST technology．Mouse sepsis models infected with E．faecalATCC 29212