第六章__化学毒物致突变作用.pptVIP

* 在移码突变中，基因产物有明显地改变，因为在突变点之后，信使RNA的每个三联体均已改变。基因产物也许是不完全的，因新的阅读框架似乎包括无义密码子(UAA、UAG及UGA)，它不代表任何氨基酸，产生一个无功能的肽链片断。移码突变较易成为致死性突变。如果减少或增加的碱基对刚好是3对，则基因产物的肽链中仅减少或增加一个氨基酸，其后果与碱基置换相似，与移码突变不一样，故不包括在移码突变范畴。 * * 选择细胞回复突变试验、微核试验、细菌DNA修复试验和SCE等四种致突变试验，即可满足要求。所以，选择的遗传毒性试验应包括5种类型的遗传学终点。 一般认为配套实验应包括多种进化程度不同的物种，如原核细胞、低等和高等真核细胞，这样观察化学毒物在不 同系统发育的多种生物体的致突变性，更具说服力。 且在时间、经费、人力及物力均比体外试验花费大。而体外试验简便易行，通常检出率大大优于体内试验。它的明显不足在于生物转化及解毒等方面与体内不同。故在配套试验中，依据试验目的，选择体内和体外试验，取长补短，综合考虑。 一般认为生殖细胞突变性要比体细胞致突变性的敏感性差。通常，对于一种受试物应当先用原核细胞或体细胞的体外试验按遗传学终点合理配套进行试验，并对有阳性结果的遗传学终点验证其在体内的真实性，再行选用生殖细胞致突变试验进行遗传危害的评价。 * * SLRL是果蝇各种测试系统中最敏感的实验，果蝇具有世代周期短、繁殖率高、饲养方便、经济、判断突变终点客观、不需活化等优点，其不足之处是它与哺乳动物差异较大，对其结果外推应慎重。一般认为，果蝇实验的阳性结果有高度的实用价值，而阴性结果在没有真核系统试验支持前不能完全认为无致突变性。SLRL能检出点突变，小缺失，重排等几种遗传变异的类型。 * 本试验多选用小鼠，也可用大鼠、仓鼠、豚鼠、果蝇等。它在哺乳动物体内进行，不需特殊设备条件，是一种较为实用的方法。其不足之处是灵敏度差和使用动物数量大，且要求一定的受孕率。 2.聚(二磷酸腺苷-核糖)多聚酶(PARP) PARP的激活为DNA损伤后细胞的早期反应之一，它催化的反应作为DNA损伤的一系列细胞反应的过程之一，可影响DNA修复及损伤的结局；它对外来因素造成基因突变和肿瘤发生可产生抑制或促进作用，对于PARP的研究具有重要的毒理学意义。 第五节 观察化学毒物致突变作用的基本方法 目前已有200多种试验，但重要的和作为常规使用的约20种。 一、观察项目的选择 1.观察的效应终点类型 将试验观察到的现象所反映的各种事件统称为遗传学终点(genetic end point)。国际环境致突变物致癌物防护委员会(ICPEMC)于1983年提出致突变试 验的遗传学终点分为5类：①DNA完整性的改变(形成加合物、断裂、交联)；②DNA重排或交换；③DNA碱基序列改变；④染色体完整性改变；⑤染色体分离改变。其中③实际上指基因突变，④指染色体畸变。 2.成套的观察项目 遗传毒理学评价程序通常为一组体内、外遗传毒理学试验。因为：①在成套观察项目中既要用体细胞检测又要用生殖细胞；除了从分子水平还要从细胞 水平来检测化学毒物的遗传毒性。②体内试验具有完整的活化系统，而体外试验则通过加入模拟代谢系统，如S9来弥补缺乏活化系统的不足。这是体内与体外试验的主要差别。在选择体内、体外试验时，还需要对其方方面面进行深入的了解。③化学毒物的致突变性有强，也有弱；有的在某一检测系统中是强致突变物，而在另一系统中可能是弱的致突变物。 关于遗传毒理学成套观察项目中那些试验可入选的原则有：①已知遗传毒性主要有基因突变、染色体畸变、染色体分离异常及原发性DNA损伤。一组可靠的试验系统应包括每一类型的遗传学终点。②通常的实验材料有病毒、细菌、真菌、培养的哺乳细胞、植物、昆虫及哺乳动物等。③体内试验与体外试验配合，体内试验接近实际情况，但由于毒性动力学或其他原因，有时会漏检致突变物。④应包括生殖细胞和体细胞。 为了将动物实验结果更准确地外推于人，在反映同一遗传学终点的多种实验中应尽可能地选择体内试验，以减少毒性差异，对于体外试验除应加模拟毒性系统以外，应尽量选用真核细胞而少用原核细胞，因为它们的DNA接触化学毒物的条件并不相同。 3.观察方法的新进展 对这些化学物质的危害性作出评价，包括遗传毒性的评价。对原有的方法提出新的要求，如自动化检测。此外，随着科学技术的进步，尤其是分子生物学技术的日新月异，有可能更准确地测定致突变作用，如转基因小鼠致突变检测系统和荧光原位杂交技术(FISH)。 (1)转基因小鼠致突变检测系统：利用穿梭载