感染性疾病标志物及快速诊断.pptVIP

四、生物芯片 生物芯片是20世纪90年代中期发展起来的一项技术。 以玻片、尼龙膜等为载体, 将大量基因片段、多肽、蛋白质等探针分子固定于支持物上后与带荧光标记的DNA、蛋白质或小分子等进行杂交，检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息，从而实现对核酸、蛋白质及其他生物成分的高通量快速检测。 病原微生物感染的快速诊断、变异及耐药机制的研究；基因分型、分子流行病学调查和抗感染药物的研制等。 制备成本高，检测仪器昂贵，特异性、敏感性有待进一步提高等因素,目前还未在临床病原微生物检测中广泛应用。 生物芯片基本类型 生物芯片 biochip 芯片实验室 分析生物芯片 DNA芯片 蛋白质芯片 细胞芯片 组织芯片 lab on chip 生物计算机芯片 蛋白质计算机芯片 DNA计算机芯片 biocomputer analytical biochip 五、质谱分析技术 质谱法 (mass spectrometry, MS)：是在高真空系统中将样品分子离解成带电的离子，并通过对生成离子的质量和强度的测定，而进行样品成分和结构分析的方法。 应用： 1. 适用于高通量蛋白质组学研究，包括蛋白质/肽质量指纹谱测定，多肽序列分析等研究； 2. 适用于临床微生物快速准确鉴定。 研究者 时间 贡献 J. J Thomson 1912 第一台质谱仪 Gohlke and McLafferty 1956 气相质谱 Biemann, Seibl et al. 1959 肽序列分析 McLafferty, Jennings et al. 1967 串联质谱 McLafferty 1973 液相质谱 Comisarow and Marshall 1974 傅立叶回旋共振质谱 Barber, Bordoli et al. 1981 快原子轰击 Yamashita, Fenn et al. 1984 电喷雾离子化用于生物大分子 Tanaka, Karas et al. 1988 基质辅助激光解吸离子化用于 生物大分子 质谱技术发展历史简介 MALDI-TOF MS技术 1.不同属种的细菌具有不同的蛋白指纹图谱，根据细菌蛋白指纹图谱可对细菌进行快速鉴定。 2.1996年，Claydon等采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF MS）鉴定革兰阴性和革兰阳性细菌。 3. 激光照射样品与基质（α-氰基-4-羟基肉桂酸，CHCA)形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程是将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分子电离的过程。离子在电场作用下加速飞过飞行管道到达检测器，被测离子的飞行时间与离子的质荷比与成正而达到检测目的；再通过专用软件分析比较，确定出病原菌特征性的指纹图谱，质量范围为2-20KDa。每种微生物都有自身独特的蛋白质组成，因而拥有独特的蛋白质指纹图谱。 MALDI-TOF: 基质辅助激光 解吸/电离-飞行时间质谱分析法 (MS) VITEK MS Microflex MALDI-TOF MS 概述(Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight ) 解吸附 离子化 加速 分离 检测 离子检测器 + + + + + + 靶板 基质/样本结晶 加速场 飞行时间 MALDI-TOF MS: 基本原理 标本分子与基质 形成基质/标本结晶 in vacuum 10-7 Torr Time of Flight Time of Flight MALDI-TOF MS:基本原理 激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分子电离的过程。 MALDI-TOF 质谱分析法 分析2,000 到20,000 道尔顿蛋白 检测150-200个质量峰 20-30 个蛋白与数据库中的理论核糖体蛋白直接匹配 其他质量峰为未知蛋白 (有可能是修饰后的核糖体蛋白) MALDI-TOF MS 通过模式匹配进行鉴定 样本谱 参考谱 完美匹配: 各峰之间无距离 次完美匹配: 各峰之间存在一定距离 质谱数据分析 VITEK MS: Advanced Spectra Classifier using a weighted bin matrix （先进的利用加权Bin矩阵的光谱分析仪） Bruker Biotyper VITEK MS 金黄色葡萄球菌 金黄色葡