液质联用技术原理与应用.pptVIP

实例 在养殖业中，常用四环素类、喹诺酮类、苯并咪唑类、磺胺类、β-内酰胺类药物作为奶牛乳房炎、子宫内膜炎、肺炎和寄生虫疾病等的治疗和预防用药；用雌激素等激素类兽药促进奶牛发育和产奶。 随着兽药的应用品种和数量不断增加，养殖业的不规范使用兽药，使得兽药在牛奶中的残留成为公共卫生和食品安全的一个重要问题，引起社会和消费者的普遍关注。 实例 牛奶中的6类75种兽药残留的LC/MS/MS的快速和高通量检测 实例 液质联用技术原理及应用 液质联用（LC/MS）技术 液质联用的前提和基础=进样+分离 根据化合物的化学特性分离样品 液质联用（LC/MS）技术 分析物被转化为气相离子而被分析 这些离子按其质荷比(m/z)分离而被检测 两种分析手段的相互补充 LC/MS联用关键 LC 1. 高效分离混合物 2. 流动相挥发后产生大量气体 3. 出口压力为大气压 4. 可以使用缓冲盐溶液 1. 需要高真空条件 2. 最好使用挥发性缓冲液 MS 接口 1.去除溶剂 2.保留样品 3.电离化合物 分离系统 检测系统 概述 LC/MS系统的常见部件示意图 LC系统 采用高压输液泵将注入进样阀的供试品随流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离的 各成分在色谱柱内被分离 利用混合物中各组份在不同的两相中溶解，分配，吸附等化学作用性能的差异，当两相作相对运动时，使各组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离。 LC分离原理 LC条件的选择与优化 离子源：是使分离出来的被分析的物质电离成离子，并将电子会聚成具有一定能量和一定几何形状的电子束。 由于被分析物质的多样性和分析要求的不同，物质电离的方法和原理也各不相同。 LC/MS离子源 大气压光电离源( APPI) 大气压电离源 (API) 电喷雾电离源 (ESI) 大气压化学 电离源 (APCI) LC/MS的离子源 ESI 通常小分子得到[M+H]+，[M+Na]+ 或[M-H]-单电荷离子，生物大分子产生多电荷离子 其易形成多电荷离子的特性可分析蛋白质和DNA 等生物大分子 化合物无需具有挥发性，可测定热不稳定的极性化合物 APCI 只产生单电荷峰 适合测定质量数小于2000Da的弱极性的小分子化合物 化合物需具有一定的挥发性，必需是热稳定的 ESI与APCI比较 应用范围 ESI 农药及残留化合物 多肽及蛋白的分子量测定 确定氨基酸序列 多肽及蛋白的纯度分析 单糖和多糖的结构分析 中极性到高极性，包括离子化合物的分析,如表面活性剂分析 APCI 农药及残留化合物 抗生素 碱性药物 小分子量样品 类固醇, 雌激素 单磺酸偶氮染料 质量分析器 质量分析器： 利用离子在电场或磁场中的运动性质，将离子按质荷比(m/z)分开并按质荷比大小排列成谱图形式. 质量分析器有：磁场和电场、四极杆、离子阱、飞行时间质谱、傅立叶变换离子回旋共振等。 单级四级杆质量分析器 扫描模式 1 全扫描（Full Scan） 可获得丰富的谱图信息、适合未知化合物的结构鉴定 2 选择离子扫描（SIM） 当全扫描无法满足灵敏度的要求时 适合于样品的定量分析 三重串联四级杆质量分析器（QQQ） 第一个四极杆(Q1)根据设定的质荷比范围扫描和选择所需的离子。 第二个四极杆(Q2) ，也称碰撞池，在所选择离子的飞行途中，引入碰撞气体，例如氮气等，用于聚集和传送离子。 第三个四极杆(Q3)用于分析在碰撞池中产生的碎片离子。 QQQ特点 LC/MS/MS 更多的结构信息，适合未知化合物的结构解析 提高灵敏度 提高子离子的选择性 复杂基质样品分析，提高定量结果的准确性 MS条件的选择与优化 (1)MS的定分子量准确，丰富的结构信息。 LC/MS优点及应用 (2)灵敏度高，常规10-7~10-8g，甚至可达10-12g，便于痕量、超痕量物质的检测。 (农药残留、有毒的动植物、法医中生物样本的毒物分析等等) LC/MS优点及应用 LC/MS优点及应用 (3)LC分离效率高，加之MS的选择能力，便于混合物分析。 LC/MS图 LC图 LC/MS优点及应用 (4)多功能，广泛适用于各类化合物： 分析热不稳定化合物 分析气相色谱-质谱无法分析的样品（无挥发性的化合物） 分析大分子量的化合物（蛋白质、DNA等） 分析液相无法分析的样品（无紫外吸收、无荧光的化合物） 应用范围：医药卫生、疾病控制、食品安全、检验检疫、质检、环保及相关的化学、生物化学等领域 * 以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统 ?分离技术?分离效率高；质量是物质固有特征之一，不同的物质有不同的质量谱，灵敏度高?定性/定量本领高?高真空环境工作 * 主要组成部件之一，离子源的性能直接影响质谱仪的主要技术指标 *