网站大量收购独家精品文档,联系QQ:2885784924

人骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞过程中的基本特征及机制研究-疾病蛋白组学专业论文.pdf.docxVIP

人骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞过程中的基本特征及机制研究-疾病蛋白组学专业论文.pdf.docx

  1. 1、本文档共77页,可阅读全部内容。
  2. 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  5. 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  6. 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  7. 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  8. 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
人骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞过程中的基本特征及机制研究-疾病蛋白组学专业论文.pdf

博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 人骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞过程中的 基本特征及机制研究 中文摘要 肥胖的产生不仅是由于脂肪细胞增大引起的,还有另外一个重要因素是脂肪 细胞数目的增加。脂肪细胞数目的增多来源于存在于脂肪组织内多潜能干细胞的 成脂分化,甚至在某些因素的刺激下,其它器官的干细胞如骨髓间充质干细胞也 可能会募集到脂肪组织分化为脂肪细胞。目前对于脂肪细胞分化的研究主要集中 于小鼠前脂肪细胞到成熟脂肪细胞这个阶段,但是对于间充质干细胞特别是人来 源的间充质干细胞如何分化为脂肪细胞这一过程了解甚少。因此,本课题研究的 主要目的是观察人骨髓问充质干细胞分化为脂肪细胞过程中的基本特征,包括增 殖特性和参与调控的转录因子的作用。 本课题中,我们利用密度梯度离心和贴壁培养的方法从人骨髓中成功分离了 问充质干细胞。从形态上观察,体外培养的人骨髓问充质干细胞成梭形,生长比 较缓慢,细胞缺乏接触抑制的特性,生长致密的克隆中心细胞成多层生长。流式 细胞检测90%以上的细胞处以G0/G1期。人骨髓问充质在体外只能进行有限传 代,多次传代后细胞出现复制性老化,大概能传至第12代。 进一步我们用含10%胎牛血清,0.5mM 3.异丁基.1.甲基黄嘌呤 (3-isobutyl一1-methylxanthine,Mix),lpM地塞米松(Dexamethasone,Dex),10pg/ml 胰岛素(Insulin),100I.tM吲哚美辛(Indo,Indomethacin)的培养液诱导细胞。按照 MDI+Indo处理3天,接着胰岛素维持1天,如此反复处理细胞至12天,最后 用仅含胰岛素的培养液维持至21天。细胞经诱导后绝大多数细胞分化为成熟的 脂肪细胞,表现为细胞胞体由原米的梭形变为圆形,细胞内有甘油三酯聚积。同 时用Real—time PCR的方法检测脂肪细胞特异性蛋白质脂肪酸结合蛋白 (422/aP2)随分化的过程表达增加。另外,脂肪细胞分化密切相关的转录因子 C/EBP]5在激素诱导过程中并没有显著变化,至分化后期有所下降。C/EBP衍H PPARy激素处理后表达增加。 以往的研究表明接触抑制的小鼠3T3一L1细胞分化时会重新进入细胞周期 (MCE,mitotic clonal expansion有丝分裂克隆扩增),我们的研究发现人脂肪组 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 织干细胞成脂分化时没有经历MCE。在我们的研究中,人骨髓间充质干细胞因 为其生长特性,细胞在分化之前不能接触抑制和同步化,分化前后细胞计数结果 表明,细胞分化处理结束后,未处理的对照组细胞数量相对诱导分化前还有一定 量增加,而分化处理组的细胞数量少于对照组,并且刺激次数越多,分化细胞的 比例越高,最终细胞数量与未诱导组相比增加越少。提示细胞分化时没有经过分 裂。进一步我们在入骨髓间充质干细胞诱导分化24小时后加入BrdU孵育48小 时,到细胞分化成熟后检测BrdU掺入和分化脂肪细胞的关系,结果显示有部分 细胞掺入BrdU,说明这些细胞还在增殖,但这些细胞均没有分化为脂肪细胞, 胞浆内没有脂滴出现;而有脂滴积聚的脂肪细胞其核内均没有BrdU掺入。对照 的3T3.L1可见绝大多数分化的细胞有BrdU掺入。这些结果提示,人骨髓间充 质干细胞与小鼠前脂肪细胞3T3.LI不同,分化时并不需要经过有丝分裂克隆扩 增的调节过程。 人骨髓问充质干细胞中C/EBPl5的表达量在激素处理的过程中并没有显著的 变化。但是当我们用RNA干扰的方法敲低C/EBP[3的表达后,细胞成腊分化能 力显著降低,提示C/EBPl3在人骨髓问充质干细胞分化为脂肪细胞的过程中是必 须的。进一步我们利用腺病毒过表达系统在细胞内过表达C/EBPl3,观察到 C/EBP[玉联合PPA脚的激动剂吲哚美辛使脂肪细胞的分化增加,说明C/EBPl3可以 促进人骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化,但必须依赖PPARy的激活。过表达 C/EBPct对细胞分化的影响类似于C/EBPl3的作用,可以促进细胞向脂肪细胞分 化,但必须同时激活PPA脚。但是在相同MOI情况下,C/EBPot促进细胞成脂分 化的作用小于C/EBP[5的作用。另外随着MOI的升高,CIEBPIS矛H C/EBPot均表现 出抗细胞增殖和促进凋亡的作用。骨髓问充质干细胞过表达PPA脚能够促使细胞 分化,并且不需要激素MDI的作用,加入PPARy的激动剂能够增强这种效果。 但是PPAI奸的过表达和激活后分化细胞内的脂滴明显小于用MDl+lndo诱导分化 的细胞,提示PPA脚可能起始了脂肪细胞的分化但是脂质代谢还需要其它基因激 活参与。另外过表达PPARY使微丝蛋白[5-actin的表达降低,但不影响p·tubulin 的表达,提示PPARy可能

您可能关注的文档

文档评论(0)

131****9843 + 关注
实名认证
文档贡献者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档