实验一通们课--2013-4.pptVIP

第一次实验内容（3个） 一、实验室生物安全 (0.5学时) 熟悉 （1）微生物学实验室生物安全意义 （2）实验室规则 革兰染色(Gram stain) 1884年由丹麦细菌学家Gram创立。 革兰染色是最常用的一种染色方法，可以将细菌初步分为革兰染色阳性菌和革兰染色阴性菌，在临床上具有非常重要的意义。 三、器材和试剂 1.菌种：白色葡萄球菌 大肠杆菌 2.试剂： 革兰染色液 初染液 结晶紫 媒染液 卢戈氏碘液 脱色液 95%乙醇 复染液 稀释石碳酸复红 3.其它：接种环 载玻片 染色盘 洗液瓶 酒精灯等 无菌操作（接种环灭菌和取菌） 涂片的厚度要适中 染色的时间控制，一一半半 冲洗的方法，不要对着涂片区冲洗 七、意义 细菌的特殊结构（示教）（二毛荚一胞） 透镜 折光率 油 1.515 1.0 空气 玻 1.52 璃 空 气 油镜原理示意图 1.平板分区划线接种-得单个菌落 分区划线注意事项 划线时接种环与平皿约成30～40度角,轻轻接触, 以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂。 第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线 约占面积的1/4 ～ 1/5。 划线为连续划线,不能间断。应占满平皿。划线 不能交叉重复。 每次划完后应灭菌。 2.斜面接种法 操作内容 1. 平板分区划线法。 2. 斜面培养基的接种方法。 3. 半固体培养基穿刺接种法。 4. 液体培养基的接种方法。 实验报告的撰写 1.细菌接种技术的具体操作步骤及注意事项。 2.革兰染色 一、目的 二、原理 三、材料 四、方法 五、结果（2+3幅图） 六、意义 七、注意事项 结果（2+3幅图） 1、绘制涂片染色的G+及G-菌的形态图并注明放大倍数（红蓝铅笔） 2、绘制示教片中各细菌特殊结构形态图并注明放大 倍数（铅笔） 预 习 抗酸染色 细菌的分布及化学因素的影响。 肠道致病菌分离培养 二、培养基分类 按用途分 营养培养基：血液琼脂培养基 基础培养基：普通琼脂培养基 选择培养基：S-S培养基 鉴别培养基：双糖铁培养基 厌氧培养基：庖肉培养基 普通固体培养基接种法 1.平板分区划线接种法：分离培养细菌。 2.斜面固体培养基接种法：纯菌的移种， 短时间保存菌种。 半固体培养基穿刺接种法 保存菌种或观察细菌的动力 液体培养基接种法 用于肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等。 三、细菌的接种方法 3.液体培养基接种法 4.半固体培养基穿刺接种法 四、细菌生长现象的观察 1.固体培养基-菌落 单个细菌分裂繁殖形成一堆肉眼可见的细菌集团。观察菌落的形态、颜色、大小、表面、边缘、湿度、透明度；在血平板上还要观察溶血情况等。 2.半固体培养基-鞭毛 观察细菌的动力 3.液体培养基 混浊生长（大多数细菌） 沉淀生长（链球菌） 膜样生长（专性需氧菌， 如结核分枝杆菌） 在实验报告册写上第七实验室 及上课时间 * * 实验一通课 第一次上课时间为4月8日上午8：00，5个学时。 第一次课请教师提前20分钟到，借示教镜，留学生名单及班长电话；安排值日分组；学生实验报告册标出第几实验室。 二、革兰染色及细菌特殊结构观察(3学时) （1）革兰染色（2.5学时），每人一张玻片。 （2）细菌特殊结构（0.5学时），为示教内容。 三、细菌接种技术(1.5学时) 普通固体培养基：9个 斜面固体培养基：9个 半固体