第六章秋质谱技术与质谱仪2.ppt

样品含盐量低 * 质量范围: 分子量小于500,000 Da * 碰撞诱导分解在碰撞室内进行,带有一 定.能量的离子进入碰撞室后,与室内惰 性气体的分子或原子(也可以是空气) 发生碰撞,离子发生碎裂. * 利用软电离技术(如ESI, MALDI和FAB)作为离子源时，所得到的质谱主要是准分子离子峰，碎片离子很少，因而也就没有结构信息。为了得到更多的信息，最好的办法是把准分子离子“打碎”之后测定其碎片离子。 * 子离子扫描常用于MRM方法开发，寻找最强碎片离子，并确定其最佳碰撞能量及相关质谱参数 –母离子扫描、中性丢失扫描可用来研究结构相似性化合物（如具有相同结构碎片、或相同结构基团的化合物） * 生物质谱在蛋白质和多肽研究中的应用 1.相对分子质量测定 2.肽谱测定 3.肽序列测定 4.蛋白质翻译后修饰 1.相对分子质量测定 MALDI-TOF的准确度高达0.1%~0.01%，远远高于目前常规应用的SDS电泳与高效凝胶色谱技术，目前可测定生物大分子的分子量高达600KDa。 SARS病毒N蛋白整体分子量 2.肽谱测定 肽质量指纹谱（Peptide Mass Fingerprinting, PMF）是蛋白质被识别特异酶切位点的蛋白酶水解后得到的肽片段的质量图谱。采用MALDI-TOF-MS测得。由于每种蛋白的氨基酸序列（一级结构）都不同，当蛋白被水解后，产生的肽片段序列也各不相同，因此其肽质量指纹图也具有特征性。 通过MALDI-TOF质谱仪得到的肽指纹图 质量相近的多肽 多肽 [M+H+] DGAPLESSSR 1019.0490 REGESTPSR 1019.0520 DFPIANGER 1019.0940 DPLASSSWR 1019.0940 YVPLKDQR 1019.1800 HLQLPAPSR 1019.1830 VLFLNGIDK 1019.2200 Peak m/z: 1019.08 串联质谱鉴定：对一个或者多个未被解析的肽段MS/MS 数据进行对库比较从而进行蛋白鉴定。是目前应用最广的高通量鉴定蛋白质方法，鉴定准确度更高，无需人工序列解析，可以实现混合蛋白的鉴定。 PSD质谱 3.肽序列测定 肽序列测定技术 C端酶解法：利用氨肽酶和羧肽酶，局限性大，灵敏度低。 质谱法：灵敏度高，准确性好，易操作，具有普适性。 N端化学降解法：用探针试剂氨基酸苯异硫氰酸酯与游离氨基作用，再用各种层析技术分离；测序速度慢，样品用量大、纯度要求高。 用串联质谱（MS/MS）可以进行多肽的从头测序（de novo sequencing），并搜索数据库以鉴定蛋白质。 化学辅助De-novo测序法，是以一种类似Edman降解的试剂进行肽段N-端修饰衍生的方法，让肽段的N-端带上负电荷，从而肽段在MS/MS碎裂时候产生的b系列离子将被中和，而只出现y系列离子，从而大大简化图谱，利用y系列离子的质量差值，便可以很容易的得到各个氨基酸序列。 蛋白质鉴定的图示 质谱图 De-novo Sequencing 序列数据库 一级质谱 二级质谱 PMF 数据库检索 后筛选 蛋白质 未知多肽 PSMs 4.蛋白质翻译后修饰 蛋白质糖基化修饰的研究最近也有报道，主要是利用蛋白质组结合生物质谱技术，通过核素标记研究N-糖基化蛋白质。 蛋白质修饰的研究一般采用二维电泳-免疫印迹-质谱技术，即用亲和技术提取修饰肽段，并用串联质谱鉴定修饰肽段来研究蛋白质磷酸化或糖基化。 生物质谱在多糖结构测定中的应用 质谱技术于20世纪50年代末开始用于糖的分析，它可以提供相对分子质量、多糖的单糖组成、糖苷键的连接方式以及分支状况等多种信息，在糖类的分析中发挥着不可替代的作用。近年来，各种软电离技术相继诞生, 使质谱技术在糖生物学的研究中取得了很大的进展。主要包括以下应用： 1.相对分子质量测定：化学电离质谱，快原子轰击 质谱 2.寡糖结构分析： GC-MS 3.寡糖序列分析：酶解 MALDI-MS 生物质谱在核酸分析中的应用 核酸的相对分子量 核酸测序 思考题 质谱分析方法的概念。 质谱仪由哪几部分组成？各部分的作用是什么？ 离子源的作用是什么？试述几种常见离子源的原理及特点。哪些离子源适合分析生物大分子？ 常见的质量分析器有哪些？ 质谱仪的主要技术指标 质谱峰的主要类型；判断质谱图上的分子离子峰的方法；Ｎ律。 什么是串联质谱？举例说明在生物质谱技术的应用。 * 质谱仪必须有电离装置把样品电离为离子，有质量分析装置把不同质荷比的离子分开，经检测器检测之后可以得到样品的质谱图，不管是哪种类型的质谱仪，其基本组成是相同，包括离子源、质量分析器、检测器和真空系统。 * 这种进样方式不必使样品充满整个储存器，因此，可适用样