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PAGE PAGE 2 实验一 大型海藻种类形态观察 （4学时第八周） 一、实验目的 了解海洋藻类大型海藻与微藻的形态与分类。 二、实验材料及用具 实验材料： 1）大型海藻标本（学院标本室）； 2）海带孢子体（可用干海带泡发），江篱（海洋学院附近打捞）；（取一部分冻存于-20冰箱，作为叶绿素提取实验的材料） 2、实验器材：显微镜、胶头滴管（每瓶藻一支）、盖玻片、载玻片、刀片（做海藻切片）。 4、试剂：70%乙醇（每组一瓶） 三、实验步骤 1、大型海藻标本观察；将标本馆的拉丁文名抄录下来，网上检索图片和分类。 2、海带的外部形态观察：藻体明显分为固着器、柄部和叶片，在叶片中央有两条平行纵走的浅沟，孢子体幼龄期叶面平滑，小海带期叶片出现凹凸现象，大海带期叶面则平直宽厚。 3、海带的内部构造： ①用徒手切片的方法，取一小块孢子体进行横切片，在显微镜下观察：孢子体的柄和叶均分为表层、皮层和髓部。 ②同样取一小块孢子体进行纵切片，在显微镜下观察：表皮层由1-2层排列紧密的小细胞组成，外皮层细胞间分布1-2层粘液腔，其腔内有分泌细胞，髓丝细胞一端膨大为喇叭花，分生细胞位于叶片与柄之间。 4、江蓠的内部构造观察： ①江蓠的纵切面。 ②江蓠的横切面。 ③江蓠囊果横切面。 5、紫菜的形态与构造： 干紫菜先用水浸泡散开，再进行观察。 固着器：由根丝集合而成。 叶状体：由一层或两层细胞构成。 柄：叶状体基部与固着器之间的部分。 四、作业： 1、绘制大型海藻图：选5个标本，注明拉丁文名，简要说明其生物学特性（利用拉丁文名进行网上检索）。 2、绘出海带和江篱的内部构造，紫菜的外形。 附1：江篱与海带的内部构造 图1. 江篱藻体的内部构造 A.藻体横切面观；B.藻体纵切面观；1表皮；2髓部细胞 3表皮细胞 图2. 海带构造 A.海带孢子体横切面；B.髓部，C.示喇叭丝；皮层部分横切面，示粘液腔道形成的时期；D.成体横切面，示粘液腔道；co皮层；e分泌细胞；hg藻丝；me髓部；m表面分生细胞；s分泌腔；v.b.f结合的喇叭丝 实验二 微型海藻形态观察和培养 （4学时，第九周） 一、实验目的 观察几种重要经济微藻的形态特征，几种掌握单细胞微藻的实验室培养方法，细胞生长曲线观察。 二、实验材料及用具 1、实验材料： 小球藻、扁藻、等鞭金藻、角毛藻、骨条藻、茧形藻、池塘水样等微藻。 2、实验仪器：电炉、恒温干燥箱、灭菌锅、pH计、可见分光光度计、血球计数板 3、实验器材：500ml 试剂瓶（每组5个）；0.45?m的滤膜（一个）；抽滤装置(或针管)；玻棒、500ml烧杯、50ml容量瓶（每组一个）；250ml锥形瓶（每组2个）、牛皮纸、细绵绳 4、试剂：蒸馏水、消毒海水、各种试剂（见培养基配方），微藻培养母液 三、实验步骤 1、微藻形态观察：分别取各种微藻水样置于载玻片上，盖上盖玻片，于显微镜下观察。先用10倍镜观察，然后转换物镜转换器用40倍观察。 2、培养基母液配制（配方见附2）：（提前配好，有兴趣的同学可与实验老师王老师联系好时间，学习配制）1000倍培养基母液（强调维生素母液的配制方法）。配方见附1。 3、培养微藻的容器、工具及用水的消毒（提前准备）： （1）培养微藻所用的容器、工具应用洗刷干净后晾干，放置恒温干燥箱中加热，120℃恒温1小时以上，自然冷却备用。 （2）加热煮沸消毒海水冷却至室温后备用。 4、配制微藻培养液。按照母液配制比例把母液加入消毒海水，配制培养液（例如，1000倍母液，则每升消毒海水中加入1毫升母液，摇晃均匀，就成了培养液）。 5、接种：取两种微藻，各按1/3～1/5接种（即把1份藻种加入3～5份培养液中）。 6、培养、管理。将接种好的微藻置于适宜的条件下培养，每天摇晃1-2次，。 7、藻细胞密度计数（方法见附3）。分光光度计测定吸光值或血球计数板计数藻细胞密度。不同种类的微藻所选用的波长不一样，一般绿藻门波长为720-750，金藻门、硅藻门波长为420。 8、本实验采用分光光度计每2天测定一次，培养时间为横坐标，藻细胞的OD值为纵坐标，绘制生长曲线。培养两周。 四、作业： 1、绘制观察到的微藻的形态图。 2、通过哪些具体措施使培养基无菌？ 3、为何配制母液？配制培养基时，为何要等消毒海水冷却后再加母液？ 4、EDTA的作用？ 5.以培养时间为横坐标，相对应藻液的OD值为纵坐标，作图。 6、计算每瓶藻的培养6天的生长速率，公式如下： K =（lnN2 – lnN1）/（ t2 - t1） （1） T = 0.6931/K （2） 其中：K为相对生长速率；t1、t2为对应的培养时间；N1和N2分别为t1、t2时的细胞密度(微藻用OD值，江篱用重量)；T为