红色荧敏光蛋白的原核表达.docVIP

分子生物学综合实验 PAGE 4 红色荧光蛋白（RFP）的原核表达 报告题目 红色荧光蛋白（RFP）的原核表达 作者姓名 饶慧 班级学号 0802班/2008114010214 指导教师 王友如 完成时间 2011年02月 生物学实验教学中心 目 录 TOC \o 1-2 \h \z \u HYPERLINK \l _Toc291535303 引言 PAGEREF _Toc291535303 \h 1 HYPERLINK \l _Toc291535304 1 实验材料及实验仪器 PAGEREF _Toc291535304 \h 4 HYPERLINK \l _Toc291535305 1.1实验材料 PAGEREF _Toc291535305 \h 4 HYPERLINK \l _Toc291535306 1.2实验仪器 PAGEREF _Toc291535306 \h 5 HYPERLINK \l _Toc291535307 2 实验方法 PAGEREF _Toc291535307 \h 7 HYPERLINK \l _Toc291535308 2.1 重组质粒的构建 PAGEREF _Toc291535308 \h 7 HYPERLINK \l _Toc291535309 2.2工程菌株的活化 PAGEREF _Toc291535309 \h 7 HYPERLINK \l _Toc291535310 2.3诱导表达 PAGEREF _Toc291535310 \h 8 HYPERLINK \l _Toc291535311 2.4 SDS检测表达蛋白 PAGEREF _Toc291535311 \h 8 HYPERLINK \l _Toc291535312 3 结果与分析 PAGEREF _Toc291535312 \h 9 HYPERLINK \l _Toc291535313 总结 PAGEREF _Toc291535313 \h 10 HYPERLINK \l _Toc291535314 参考文献 PAGEREF _Toc291535314 \h 11 HYPERLINK \l _Toc291535315 致谢 PAGEREF _Toc291535315 \h 13 红色荧光蛋白的原核表达 饶慧 （指导老师：王友如） （湖北师范学院生命科学学院 生物科学0802班 湖北 黄石 435002） 摘 要 实验目的：研究红色荧光蛋白（Red Fluorescent Protein，RFP）基因在大肠杆菌中原核表达。 实验方法：通过分别将DH-5ɑ(pDsRed-N1)和DH-5ɑ (pET-28ɑ)提取质粒、酶切并连接形成重组质粒pET-28a-RFP，将重组质粒通过转化的方法把含红色荧光蛋白（RFP）外源基因转入大肠杆菌体内进行表达，再用IPTG诱导RFP基因表达，可以看到显现红色，最后根据SDS电泳结果，判断RFP基因在大肠杆菌中是否成功表达。 实验结果：结果显示构建的重组质粒pET-28ɑ-RFP在E.coli中成功表达。 关键词 红色荧光蛋白；质粒重组；原核表达；诱导表达 Prokaryote Expression of Red Fluorescent Protein (RFP) Rao Hui (Class 0802, College of Biology Science ,Hubei Normal University, Huangshi, Hubei,435002 ) Abstract Objective: To study the expression of the RFP gene in the E.coli. Methods: Extract the plasmid of the DH-5ɑ (pDsRed-N1) and DH-5ɑ (pET-28ɑ). Then the two plasmids are cut by enzyme and are connected to form pET-28a-RFP recombined plasmid. Guiding the recombined plasmid, which contains exogenous genes of RFP, into E.coli for expression, through transformative method. The expression of RFP gene can be induced by the IPTG