基于生物光谱对等离子体诱变雨生红球藻机理及突变体快速筛选方法的研究-生物物理专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 摘要摘要 摘要 摘要 虾青素作为一种极强的抗氧化剂具有抵御紫外线、增强机体免疫、消炎、抗 癌和着色等多种重要的生物学功能，因此在化妆品、医药、保健和水产等领域具 有广泛的应用前景。然而虾青素在动物和人体内不能自身合成，需要从体外摄取。 雨生红球藻作为一种淡水生的单细胞绿藻是天然虾青素生产的主要来源。然而在 规模化养殖中雨生红球藻具有生长速率低、易遭受外源生物的污染和生物量低的 缺点，这就需要对原始的出发藻株进行诱变选育。在本论文中我们采用操作简单、 诱变效率较高的大气压介质阻挡放电(DBD)对雨生红球藻进行诱变以获得高产 虾青素的突变藻株，并对低温等离子体作用于雨生红球藻的诱变效应进行了初步 探索。在获得高产有益突变株中，除了应用高效的诱变技术我们还建立能够应用 于研究和生产实践的快速、有效的生物光谱快速筛选方法。 论文的主要研究成果总结如下： 1、低温等离子体诱变实验条件和参数优化。我们利用低温等离子体对雨生 红球藻出发株进行诱变处理，通过优化作用剂量、放电时间等参数，确定了最佳 的诱变条件并得到了诸多雨生红球藻突变株。 2、高产虾青素雨生红球藻光谱筛选的研究。我们建立了基于红外和拉曼显 微光谱成像技术对高产虾青素突变藻株的快速筛选方法，并且能够在微观尺度上 对虾青素、p胡萝卜素、蛋白质、脂类和多糖的含量和空间分布进行快速定量分 析。尤其是在红外光谱中1(1740)／1(1156)与虾青素的含量一致，可以作为反映不 同藻株中虾青素含量的一个重要指标。同时，利用拉曼光谱显微成像并结合多元 曲线分辨(MCR)分析方法，能够在单细胞水平上对虾青素、B胡萝卜素和叶绿 素的含量实现定量分析。此外，应用红外和拉曼光谱结合主成分分析(PCA)能 够实现不同虾青素产量的雨生红球藻突变株快速区分。我们还应用近红外光谱 (NIRS)技术并结合生化检测建立了基于偏最小二乘(PLS)的生物量、虾青素 含量及虾青素在藻细胞的干重的百分含量的预测模型，进一步我们又对不同虾青 素产量的雨生红球藻突变株进行预测。 3．高产虾青素突变株特性的研究。我们对经过DBD诱变得到的高产虾青素 雨生红球藻突变株的生理生化进行了进一步的分析。比如，应用随机扩增多态性 DNA(RAPD)对遗传变异进行检测，应用高效液相色谱(HPLC)对抑制剂尼 古丁和二苯胺(Nicotine和Diphenylamine)作用下的虾青素合成路径中的各类色 素含量进行了分析。同时，我们还分别应用脉冲振幅调制荧光技术(P枷F)和 实时定量PCR对不同藻株的光合作用活力和基因表达水平进行了检测。实验结 万方数据 摘要果表明突变株中虾青素合成水平的提高与催化番茄红素到 摘要 果表明突变株中虾青素合成水平的提高与催化番茄红素到B胡萝b素转变的番 茄红素环化酶(LCY)的基因表达水平的升高有关。 4．低温等离子体作用的生物学效应和机理的研究。我们利用生化测定法对 等离子作用后的雨生红球藻细胞进行了检测和分析，证实了放电过程中的自由基 是引发各类生物学效应的一个重要因素。 关键词：显微光谱成像虾青素雨生红球藻近红外光谱技术介质阻挡放电实 时荧光定量PCR随机扩增多态性DNA II 万方数据 AbstractABSTRACT Abstract ABSTRACT Astaxanthin，all excellent antioxidant，has various important biological functions including UV light protection，immune response，anti—inflammatory，anti—cancer and pigmentation，therefore it shows applications in cosmetic，pharmaceutical， nutraceutical and aquaculture industries．However，astaxanthin cannot be synthesized by animals and humans themselves．Instead，Haematococcus pluvialis阻pluvialis)，a type of freshwater green alga，has become one of the potent sources for natural astaxanthin production．Yet the industrial large·scale production of H．pluvialis is still challenging task because of the intrinsic shortcomings